【摘 要】
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【目的】 本研究旨在构建小鼠Quaking基因的主要转录本Quaking-5（Qki-5）的真核表达载体，利用生物信息学软件预测分析其结构与功能特征，检测该基因的组织表达谱，并在小鼠AML12肝细胞系中探究Qki-5过表达对癌症相关基因表达的影响。【方法】 提取小鼠肝脏组织的总RNA，反转录为cDNA，通过PCR扩增Qki-5转录本的蛋白编码区（Coding Sequence，CDS）全长，将获得
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31771301）； 国家卫生健康委员会时间生物学重点实验室2022年度开放基金（NHCC-2022-01）；
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【目的】 本研究旨在构建小鼠Quaking基因的主要转录本Quaking-5（Qki-5）的真核表达载体，利用生物信息学软件预测分析其结构与功能特征，检测该基因的组织表达谱，并在小鼠AML12肝细胞系中探究Qki-5过表达对癌症相关基因表达的影响。【方法】 提取小鼠肝脏组织的总RNA，反转录为cDNA，通过PCR扩增Qki-5转录本的蛋白编码区（Coding Sequence，CDS）全长，将获得的目的片段与线性化载体pcDNA3.1-Puro-N-3HA进行同源重组连接以获得pcDNA3.1-mQki-5。通过在线软件对Qki-5基因序列及其编码蛋白进行生物信息学分析，并利用实时荧光定量PCR（qPCR）检测Qki-5基因在小鼠不同组织中的表达谱，同时使用免疫组织化学技术检测QKI-5蛋白在小鼠肝脏组织的表达分布。之后，将pcDNA3.1-mQki-5重组质粒和pcDNA3.1-Puro-N-3HA空质粒分别转染至AML12细胞，通过qPCR和Western Blotting（WB）检测Qki-5基因在mRNA和蛋白水平的表达，并进一步检测Qki-5基因在AML12细胞中过表达后对癌症相关基因表达的影响。【结果】 成功构建了pcDNA3.1-mQki-5真核表达载体；小鼠Qki-5基因的CDS区长度为1026 bp，共编码341个氨基酸；小鼠QKI-5蛋白为亲水性蛋白，不含跨膜结构和信号肽，存在26个磷酸化位点，且小鼠QKI-5蛋白的三级结构与人和大鼠完全一致；在检测的十二个组织中，Qki-5在小鼠全脑的表达量最高，在十二指肠的表达量最低；QKI-5在小鼠肝脏组织中主要表达于肝细胞细胞核中；在AML12细胞过表达QKI-5后，会引起癌症相关基因P53和Ccnd1的mRNA表达水平显著升高。【结论】 本研究成功构建了小鼠Qki-5基因真核表达载体；Qki-5基因在小鼠全脑、肺脏等组织中表达量较高；QKI-5主要表达分布于小鼠肝细胞细胞核内；此外，在AML12细胞中QKI-5的过表达会引起P53和Ccnd1的表达水平升高。本研究为进一步探究小鼠Qki-5基因的功能提供了关键材料。
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