探讨脑胶质瘤组织中微小RNA(miR)-433、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的表达水平及miRNA-433对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响和作用机制。
方法(1)收集新乡医学院第一附属医院神经外科自2010年1月至2014年12月手术切除并经病理检查证实的脑胶质瘤标本42例(低级别14例，高低级别28例)，另外选取同期因颅脑外伤手术切除的正常脑组织标本13例。采用RT-PCR检测脑胶质瘤组织和正常脑组织miRNA-433、HDAC6 mRNA的表达。(2)体外常规培养脑胶质瘤U251细胞，分为空白对照组、无义序列对照组和miRNA-433模拟物组，后2组分别转染无义序列和miRNA-433模拟物，空白对照组不做处理。RT-PCR检测细胞miRNA-433和HDAC6、P21 mRNA的表达。CCK-8法检测培养1~5 d时的细胞存活率。流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率。Transwell实验检测细胞的侵袭能力。Western blotting检测细胞HDAC6蛋白的表达。(3)构建野生型(WT)HDAC6 3’-UTR、突变型(MUT)HDAC6 3’-UTR荧光报告载体。将miR-433模拟物+WT HDAC6 3’-UTR、无义序列+WT HDAC6 3’-UTR分别转染U251细胞，双荧光素酶实验检测2组细胞的荧光强度。将miR-433模拟物+MUT HDAC6 3’-UTR、无义序列+MUT HDAC6 3’-UTR分别转染U251细胞，双荧光素酶实验检测2组细胞的荧光强度。(4)将U251细胞分为无义序列对照组、HDAC6表达质粒组、HDAC6 siRNA组，分别转染无义序列、HDAC6表达质粒和HDAC6 siRNA后RT-PCR检测细胞P21、HDAC6 mRNA及miRNA-433的表达。将U251细胞分为miR-433模拟物组、miR-433模拟物+HDAC6表达质粒组，分别转染miR-433模拟物、miR-433模拟物+HDAC6表达质粒后1~5 d时采用CCK-8法检测细胞存活率。
结果(1)高级别脑胶质瘤、低级别脑胶质瘤、正常脑组织中miRNA-433的表达水平逐渐增高，HDAC6 mRNA的表达水平逐渐降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。脑胶质瘤组织中二者的表达呈负相关关系(r=0.829，P=0.000)。(2)与空白对照组和无义序列对照组比较，miRNA-433模拟物组U251细胞miRNA-433、P21 mRNA表达水平升高，HDAC6 mRNA表达水平降低，培养2~5 d时细胞存活率降低，G0/G1期细胞所占比例增高，细胞凋亡率升高，穿膜细胞数减少，HDAC6蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义(P< 0.05)。(3)miR-433模拟物+WT HDAC6 3’-UTR组细胞的荧光素酶活性明显低于无义序列+WT HDAC6 3’-UTR组，差异有统计学意义(P<0.05)；miR-433模拟物+MUT HDAC6 3’-UTR组和无义序列+MUT HDAC6 3’-UTR组细胞的荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)HDAC6 siRNA组、无义序列对照组、HDAC6表达质粒组细胞HDAC6 mRNA的表达水平逐渐增高，P21 mRNA的表达水平逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)。培养2~5 d时，miR-433模拟物+HDAC6表达质粒组细胞存活率高于miR-433模拟物组，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论miRNA-433在脑胶质瘤组织中呈低表达水平，过表达miRNA-433可能通过调控HDAC6抑制脑胶质瘤细胞的侵袭、增殖，并促进细胞凋亡。