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【目的】对广西南宁市郊三塘镇某养殖场患病罗非鱼进行病原菌分离鉴定及药敏试验，旨在找出罗非鱼的发病原因，为该病的有效防治提供依据。【方法】用常规方法从患病濒死罗非鱼脑部分离病原菌，通过人工感染试验确定分离菌株的致病性，用API20 Strep生化鉴定系统和16S rRNA鉴定病原菌，并采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。【结果】分离获得的4株革兰氏阳性球菌（GXN01、GXN02、GXN03和GXN04）对健康罗非鱼均有很强的致病性，是导致罗非鱼发病死亡的病原菌，经API20 Strep生化鉴定和16S rR