【摘 要】
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目的构建白色念珠菌的菌丝壁蛋白1(Hwp1)N端片段的重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白。方法PCR扩增目的基因,将其连接到pMD18-T载体上,经测序验证成功后,将目的基因连接
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目的构建白色念珠菌的菌丝壁蛋白1(Hwp1)N端片段的重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白。方法PCR扩增目的基因,将其连接到pMD18-T载体上,经测序验证成功后,将目的基因连接至表达载体pET28a(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,提取质粒进行PCR、双酶切法鉴定,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达Hwp1的N端片段。结果成功制备了重组质粒pMD18-T-Hwp1及pET28a(+)-Hwp1,PCR及双酶切法鉴定结果。构建了含重组质粒pET28a(+)-Hwp1的大肠杆菌工程菌,经IPTG诱导能高效表达目的蛋白。结论成功构建、表达了Hwp1的N端片段,为进一步研究其在诊断白色念珠菌病中的作用奠定了基础。
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