论文部分内容阅读
摘要 应用英国RANDOX的ELISA试剂盒和免疫金标试纸同时检测10份虾样，阳性率均为10%，两种方法都具有微量、特异、准确的优点。前者需要有酶标仪等仪器，试验时间长、成本高，但能用准确的数字表达抗体水平；后者不需要特殊仪器设备，试验时间短、成本低，适用于企业自检和大批量样品筛选。
关键词 氯霉素；残留；金标试纸；酶联免疫
氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作为一种广谱、高效的抗生素，在国内外常用于动物各种传染性疾病的治疗，也曾在水产养殖业中得到普遍应用；但其在临床医学上的毒副作用大，对人类健康构成巨大威胁[1]。因此，动物源食品的质量安全问题受到高度重视，各国均对氯霉素最大允许残留限量制定了十分严格的规定[2]。
20世纪70年代以来，免疫化学分析技术在小分子化合物检测领域中的应用研究不断深入。酶联免疫（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法已成为各监测部门及实验室内快速检测氯霉素的常规方法，其灵敏度高、稳定性好[3]，特别适用于大批量样品筛检；基于胶体金免疫层析技术（gold immunochromatographic assay，GICA）的快速诊断试纸条（简称金标试纸条），已逐渐应用于生物医学、动植物检疫、食品安全监督等诸多领域，与ELISA试剂盒相比，其优点是更为简便快速、无需检测仪器，且成本低、无污染。
我院与浙江大学农药与环境毒理研究所根据竞争式GICA原理，研制了动物源食品中氯霉素残留的胶体金免疫层析试纸条。为了检验该试纸的准确性，用英国RANDOX的ELISA试剂盒进行比较试验研究。
1材料与方法
1.1试验材料
氯霉素酶联免疫检测试剂盒，英国RANDOX（含已被包被抗体的酶标板，酶标记抗原、稀释剂/洗涤缓冲剂、组织样品萃取剂、单组分底物/发色剂、牛奶缓冲剂、标准液、反应终止液）。
氯霉素免疫金标快速检测试纸（铝箔包装，内装检测卡、干燥剂和比色卡），由浙江大学与宁波市农业科学研究院联合研制。
待检虾10份，取自宁波4个市场。
1.2方法
1.2.1酶联免疫吸附试验操作步骤。
（1）样品前处理：取3g均质好的组织样品，加入6mL乙酸乙酯，匀浆1min；2 000rpm离心分离15min，抽4mL上层清液，在70℃吹干。加入2mL的异辛烷/三氯甲烷（2∶3）溶解剩余物，涡旋振荡2min。置于2 000rpm下离心分离15min，取上清液用于检测。
（2）样品检测。根据试剂盒说明书进行。
（3）判定标准。根据标准曲线进行计算。
1.2.2金标试纸试验操作步骤。
（1）样品前处理。取3g均质好的组织样品，加入6mL乙酸乙酯，剧烈振荡10min，3 000rpm离心5min，转移4mL上层乙酸乙酯相至另一洁净试管，50℃下氮流吹干，残留物溶于1mL正己烷，再加入1mL 磷酸盐缓冲溶液（PBS），旋涡振荡1min，3 000rpm离心5min，吸取下层PBS相用于检测。
（2）样品检测。将氯霉素速测金标试纸条取出恢复至室温，插入各待检样品液中开始计时。5～8min后，判读结果。每个试样作4个重复。
（3）样品判断。通过观察检测区检测线（T）和对照区对照线（C）的色带颜色判断样品中有无氯霉素，并根据比色卡判定氯霉素水平。在对照线出现一条色带而在检测线不出现色带判为阴性；在对照线出现一条色带而在检测线出现一条颜色很淡的线判为弱阳性；在对照线出现一条色带而在检测线出现一条颜色很深的线判为强阳性。
2试验结果
在10份虾样品中，用ELISA试剂盒检测，阳性1份，阴性9份，阳性率为10%；用免疫金标试纸检测，阳性1份，阴性9份，阳性率为10%。
3小结
应用英国RANDOX的ELISA试剂盒和自主研制的免疫金标试纸同时检测10份虾样，阳性率均为10%，两种检测方法的检测结果相符。
目前对虾产品中的氯霉素残留检测已建立了多种方法。在我国，应用最多的是GC/MS法和ELISA法。而通过试验比较可知，免疫金标快速检测试纸前处理相对简单，检测时不需要特殊仪器设备，且检测过程只需要8～10min。因此，免疫金标快速检测试纸适用于大批量样品的现场初筛和企业的自检，是一种值得推广的新的检测技术。
4参考文献
[1] 李哓川，孔轶群.水产品中氯霉素残留测定方法的分析研究[J].海洋水产研究，2002，23（4）：76-80.
[2] 林维宣.各国食品中农药兽药残留限量规定[M].大连：大连海事大学出版社，2002.
[3] 王自良，王建华，杨艳艳，等.抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报，2006，34（5）：6-12.
关键词 氯霉素；残留；金标试纸；酶联免疫
氯霉素（Chloramphenicol，CAP）作为一种广谱、高效的抗生素，在国内外常用于动物各种传染性疾病的治疗，也曾在水产养殖业中得到普遍应用；但其在临床医学上的毒副作用大，对人类健康构成巨大威胁[1]。因此，动物源食品的质量安全问题受到高度重视，各国均对氯霉素最大允许残留限量制定了十分严格的规定[2]。
20世纪70年代以来，免疫化学分析技术在小分子化合物检测领域中的应用研究不断深入。酶联免疫（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法已成为各监测部门及实验室内快速检测氯霉素的常规方法，其灵敏度高、稳定性好[3]，特别适用于大批量样品筛检；基于胶体金免疫层析技术（gold immunochromatographic assay，GICA）的快速诊断试纸条（简称金标试纸条），已逐渐应用于生物医学、动植物检疫、食品安全监督等诸多领域，与ELISA试剂盒相比，其优点是更为简便快速、无需检测仪器，且成本低、无污染。
我院与浙江大学农药与环境毒理研究所根据竞争式GICA原理，研制了动物源食品中氯霉素残留的胶体金免疫层析试纸条。为了检验该试纸的准确性，用英国RANDOX的ELISA试剂盒进行比较试验研究。
1材料与方法
1.1试验材料
氯霉素酶联免疫检测试剂盒，英国RANDOX（含已被包被抗体的酶标板，酶标记抗原、稀释剂/洗涤缓冲剂、组织样品萃取剂、单组分底物/发色剂、牛奶缓冲剂、标准液、反应终止液）。
氯霉素免疫金标快速检测试纸（铝箔包装，内装检测卡、干燥剂和比色卡），由浙江大学与宁波市农业科学研究院联合研制。
待检虾10份，取自宁波4个市场。
1.2方法
1.2.1酶联免疫吸附试验操作步骤。
（1）样品前处理：取3g均质好的组织样品，加入6mL乙酸乙酯，匀浆1min；2 000rpm离心分离15min，抽4mL上层清液，在70℃吹干。加入2mL的异辛烷/三氯甲烷（2∶3）溶解剩余物，涡旋振荡2min。置于2 000rpm下离心分离15min，取上清液用于检测。
（2）样品检测。根据试剂盒说明书进行。
（3）判定标准。根据标准曲线进行计算。
1.2.2金标试纸试验操作步骤。
（1）样品前处理。取3g均质好的组织样品，加入6mL乙酸乙酯，剧烈振荡10min，3 000rpm离心5min，转移4mL上层乙酸乙酯相至另一洁净试管，50℃下氮流吹干，残留物溶于1mL正己烷，再加入1mL 磷酸盐缓冲溶液（PBS），旋涡振荡1min，3 000rpm离心5min，吸取下层PBS相用于检测。
（2）样品检测。将氯霉素速测金标试纸条取出恢复至室温，插入各待检样品液中开始计时。5～8min后，判读结果。每个试样作4个重复。
（3）样品判断。通过观察检测区检测线（T）和对照区对照线（C）的色带颜色判断样品中有无氯霉素，并根据比色卡判定氯霉素水平。在对照线出现一条色带而在检测线不出现色带判为阴性；在对照线出现一条色带而在检测线出现一条颜色很淡的线判为弱阳性；在对照线出现一条色带而在检测线出现一条颜色很深的线判为强阳性。
2试验结果
在10份虾样品中，用ELISA试剂盒检测，阳性1份，阴性9份，阳性率为10%；用免疫金标试纸检测，阳性1份，阴性9份，阳性率为10%。
3小结
应用英国RANDOX的ELISA试剂盒和自主研制的免疫金标试纸同时检测10份虾样，阳性率均为10%，两种检测方法的检测结果相符。
目前对虾产品中的氯霉素残留检测已建立了多种方法。在我国，应用最多的是GC/MS法和ELISA法。而通过试验比较可知，免疫金标快速检测试纸前处理相对简单，检测时不需要特殊仪器设备，且检测过程只需要8～10min。因此，免疫金标快速检测试纸适用于大批量样品的现场初筛和企业的自检，是一种值得推广的新的检测技术。
4参考文献
[1] 李哓川，孔轶群.水产品中氯霉素残留测定方法的分析研究[J].海洋水产研究，2002，23（4）：76-80.
[2] 林维宣.各国食品中农药兽药残留限量规定[M].大连：大连海事大学出版社，2002.
[3] 王自良，王建华，杨艳艳，等.抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报，2006，34（5）：6-12.