目的 探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白表达水平的调控效应.方法 使用4.5、10和50 J/cm2 UVB照射HaCaT细胞,照射后加入新鲜培养基继续培养4h和12 h,同时设相同处理但不照射UVB的细胞为对照细胞.另设观察组,在照射后立即(包括对照细胞),使用含蛋白酶抑制剂E64D(10 μg/L)和胃酶抑素(10 μg/L)的培养基孵育4h和12h,以阻断对p62的降解.使用Western印迹法测定HaCaT细胞p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白的表达水平.结果 50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后4h,p62表达水平(p62与内参的比值为0.473±0.022)较对照细胞(0.246±0.038)升高(t=15.27,P＜0.05);阻断溶酶体后,细胞新生p62的水平(0.445±0.035)与阻断溶酶体的对照(0.244±0.016)相比,仍为上调(t=7.62,P＜ 0.05).在4.5 mJ/cm2 UVB照射细胞后12h,与对照(0.254±0.035)相比,HaCaT细胞p62表达上调(0.497±0.047,t=22.89,P＜0.05);阻断溶酶体后,与阻断溶酶体的对照(0.257±0.025)相比,p62表达水平仍然上调(0.548±0.051,t=17.42,P＜0.05).4.5 mJ/cm2和50 mJ/cm2UVB照射后4h和12h,对照细胞和照射细胞间的Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异均无统计学意义(P＞0.05),阻止溶酶体对自噬体内容物的降解也未能发现Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异(P＞0.05).结论 p62表达在不同剂量UVB照射和照射后不同时间存在差异调控,并且这种调控效应与自噬体形成可能没有生物学联系。
不同剂量中波紫外线对HaCaT细胞p62及自噬体形成关键基因Beclin-1 、Atg12和Atg3的调控效应研究
【摘 要】
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目的 探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白表达水平的调控效应.方法 使用4.5、10和50 J/cm2 UVB照射HaCaT细胞,照射后加入新鲜培养基继续培养4h和12 h,同时设相同处理但不照射UVB的细胞为对照细胞.另设观察组,在照射后立即(包括对照细胞),使用含蛋白酶抑制剂E64D(10 μg/L)和胃酶抑素
【机 构】
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300052天津医科大学总医院皮肤科,中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室,中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室
【出 处】
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中华皮肤科杂志
【发表日期】
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2014年47期
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