【摘 要】
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目的 研究周期素蛋白依赖性激酶-5(Cdk5)激活剂p35表达在肾小球足细胞损伤中的作用.方法 分别培养离体分化成熟的肾小球足细胞、并分离纯化肾小球,应用免疫印迹法和免疫沉淀
【机 构】
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宁夏人民医院肾脏内科,宁夏,银川,750011Department of Nephrology,Ningxia people’s Hospital,Yinchuan 750002,China;
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目的 研究周期素蛋白依赖性激酶-5(Cdk5)激活剂p35表达在肾小球足细胞损伤中的作用.方法 分别培养离体分化成熟的肾小球足细胞、并分离纯化肾小球,应用免疫印迹法和免疫沉淀、同位素标记等方法检测Cdk5和p35的表达及Cdk5的活性,同时观察小鼠肾小球发育成熟的时间周期和体外成熟分化足细胞的发育成熟时间周期中 Cdk5和p35在肾小球发育和足细胞分化的不同时期的表达.并以分化成熟的离体足细胞为研究对象,分为正常细胞组和p35 siRNA组(p35表达沉默组),应用免疫印迹法观察2组中足细胞标志物WT1及促凋亡蛋白Cleaved caspase3的表达及凋亡.结果 Cdk5及其激活剂p35在成熟分化肾小球足细胞、分离纯化肾小球中均有表达;在小鼠肾小球发育过程中(胚胎14、18、22 d、生后2 d及成年鼠)p35的表达随肾小球发育成熟的程度而增强(P＜0.05),在不同分化成熟时期的足细胞(0、2、4、6、8 d)中得到同样的结果(P＜0.05);沉默p35的表达(p35 SiRNA组),可引起足细胞特异性标志物,WT1表达减少,表示细胞凋亡的Cleaved caspase3蛋白增加,说明足细胞受到损伤、细胞内结构发生改变.结论 Cdk5及其激活剂p35在足细胞中均有表达,p35的表达随足细胞分化成熟而增加;沉默p35的表达可引起足细胞促凋亡蛋白Cleaved caspase3增多,WT1数量减少,说明p35在维持足细胞的功能和形态中起重要作用.
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