【摘 要】
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为了建立稳定的玄参ISSR-PCR反应体系,本试验采用5因素（dNTPs、Taq DNA聚合酶、MgCl2、引物及模板）5水平正交设计筛选PCR体系,并利用单因子梯度进一步优化反应体系各因素浓度和
【机 构】
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西北农林科技大学生命科学学院,镇坪县农业科学技术研究所
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为了建立稳定的玄参ISSR-PCR反应体系,本试验采用5因素（dNTPs、Taq DNA聚合酶、MgCl2、引物及模板）5水平正交设计筛选PCR体系,并利用单因子梯度进一步优化反应体系各因素浓度和扩增程序（退火温度、延伸时间和循环次数）。结果表明：在20μl反应体系中含10×buffer,0.3 mmol/L dNTPs,0.5-1.0 UTaq DNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L引物,150 ng模板,扩增效果最好。PCR扩增程序：94℃预变性5 min;94℃
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