【摘 要】
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为了阐明临床鼠伤寒沙门菌（CST1、CST2、CST3和CST4）多重耐药机制，本试验通过2倍微量稀释法测定不同抗菌药物在多重耐药泵抑制剂[苯丙氨酸-精氨酸-β-萘胺（PAβN）和羰基氰化物间氯苯腙（CCCP）]、多重耐药泵AcrB和多重耐药泵调控蛋白存在及缺失条件下对鼠伤寒沙门菌的最小抑菌浓度（MIC）;用实时荧光定量PCR（Real-time RT-PCR）检测临床菌和鼠伤寒沙门菌CVCC54
【基金项目】
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河南省高等学校重点科研项目（22A230008）；
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为了阐明临床鼠伤寒沙门菌（CST1、CST2、CST3和CST4）多重耐药机制，本试验通过2倍微量稀释法测定不同抗菌药物在多重耐药泵抑制剂[苯丙氨酸-精氨酸-β-萘胺（PAβN）和羰基氰化物间氯苯腙（CCCP）]、多重耐药泵AcrB和多重耐药泵调控蛋白存在及缺失条件下对鼠伤寒沙门菌的最小抑菌浓度（MIC）;用实时荧光定量PCR（Real-time RT-PCR）检测临床菌和鼠伤寒沙门菌CVCC541（ST）的多重耐药泵基因表达水平；随后用PCR扩增临床菌喹诺酮耐药决定区和多重耐药泵调控蛋白编码基因并进行测序分析；依据所测序列，选取发生突变的耐药泵相关蛋白，构建该蛋白重组质粒并在临床突变菌中过表达并检测其对MICs的影响。结果显示：PAβN可导致盐酸四环素、多西环素、加替沙星和恩诺沙星对所测细菌的MICs下降3.00～26.67倍；临床菌acrA表达水平相对ST菌增加3～9倍。CST2、CST3和CST4中，多重耐药泵编码基因acrF、mdfA和emrB表达水平相对ST菌增加5～15倍。AcrB失活后，大部分药物对基因失活菌的MICs下降3～80倍，但多重耐药泵调控蛋白RamA、MarA和SoxS分别失活后，所测药物对基因缺失菌的MICs均未发生显著改变；测序结果表明，CST2和CST3染色体内AcrAB的负调控蛋白AcrR携带Ser216→Ala突变，CST4的acrR由于1个碱基缺失导致其转录提前终止；当ST的acrR在临床突变菌中过表达后，盐酸四环素、头孢噻呋钠、多西环素、恩诺沙星和加替沙星对细菌的MICs下降3.00～21.40倍。本试验首次在临床鼠伤寒沙门菌中检测到AcrR突变，该突变参与细菌耐药调控。
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