【摘 要】
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目的 探讨人参皂苷Rg1诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向髓核样细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)分化的机制.方法 从成年SD大鼠中分离培养BMSCs.通过CCK-8法检测不同浓度人参皂苷Rg1(0,2.5,5,10,20 μmol·L-1)对BMSCs生存活性的影响.将细胞分为空白组,5 μmol·L-1人参皂苷Rg1干预组和10 μmol·L-1人参皂苷Rg1干预组.培养48 h后通过流式细胞术检测
【机 构】
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河南省中医院脊柱科,郑州450000
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目的 探讨人参皂苷Rg1诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向髓核样细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)分化的机制.方法 从成年SD大鼠中分离培养BMSCs.通过CCK-8法检测不同浓度人参皂苷Rg1(0,2.5,5,10,20 μmol·L-1)对BMSCs生存活性的影响.将细胞分为空白组,5 μmol·L-1人参皂苷Rg1干预组和10 μmol·L-1人参皂苷Rg1干预组.培养48 h后通过流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测NPCs标志蛋白胶原蛋白2型(collagen type 2,COL2)、Aggrecan和配对盒基因(paired box gene 1,Pax1)的表达;将细胞分为空白组、人参皂苷Rg1干预组、人参皂苷Rg1干预+NC mimic组和人参皂苷Rg1干预+miR-138-5p mimic组;通过以上方法进行进一步检测miR-138-5p对人参皂苷Rg1诱导BMSCs分化的影响;双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀法检测miR-138-5p和sirtuin-1 (SIRT1)的靶向关系;转染pcDNA-SIRT1检测其对miR-138-5p诱导BMSCs分化的影响.结果 2.5,5,10 μmol·L-1人参皂苷Rg1呈剂量依赖性增强BMSCs活力(P＜0.05);与空白组比较,5μmol·L-1和10 μmol·L-1人参皂苷Rg1干预组呈剂量依赖性抑制细胞凋亡(P＜0.05),促进NPCs标志蛋白表达(P＜0.05);与人参皂苷Rg1干预组相比,人参皂苷Rg1+miR-138-5p组BMSCs凋亡率增加(P＜0.01),NPCs标志蛋白表达减少(P＜0.01);此外,SIRT1是miR-138-5p的靶基因;与miR-138-5pmimic+pcDNA-3.1组相比,miR-138-5pmimic+pcDNA-SIRT1组细胞凋亡率降低(P＜0.01),NPCs标志蛋白表达增加(P＜0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过调控miR-138-5p/SIRT1轴诱导BMSCs向NPCs增殖和分化.
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