【摘 要】
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目的 研究hFRNK基因对结肠癌细胞Colo320WT中E-钙黏素(E-cadherin)/β-连环素(β-catenin)复合物的影响.方法 利用AdEasyTM系统在大肠肝菌内同源重组构建表达人FRNK基因的腺
【机 构】
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武汉大学人民医院消化内科,中国科学院武汉病毒所病毒学国家重点实验室,武汉市第一人民医院消化内科
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目的 研究hFRNK基因对结肠癌细胞Colo320WT中E-钙黏素(E-cadherin)/β-连环素(β-catenin)复合物的影响.方法 利用AdEasyTM系统在大肠肝菌内同源重组构建表达人FRNK基因的腺病毒载体pAdhFRNK.脂质体转染pCR3.1/GR质粒于结肠癌细胞Colo320中,G418筛选出稳定表达CCK-2R的阳性克隆,RT-PCR鉴定.用10-8 mol/L胃泌素干预Colo320WT细胞12 h和pAdhFRNK体外感染Colo320WT细胞2 d后,再用10-8 mol/L的胃泌素干预细胞12 h,然后用免疫共沉淀观察TX-100可溶性部分和不溶性部分的E-cadherin和β-catenin的表达.利用细胞化学方法观察E-cadherin和β-catenin在Colo320WT细胞中的分布情况.结果 在胃泌素干预12 h后的TX-100可溶性部分中,E-cadherin和β-catenin的表达量明显降低,而TX-100不溶解部分表达增加.pAdhFRNK感染胃泌素干预后的细胞,在TX-100可溶性部分中,E-cadherin和β-catenin的表达量增加,而TX-100不溶性部分中表达降低.细胞化学方法显示,E-cadherin和β-catenin在胃泌素干预12 h后,由胞膜向胞内和胞核转移,而胃泌素干预pAdhFRNK感染后的细胞中,两者分布又逆转.结论 hFRNK基因可明显对抗外源性胃泌素引起Colo320WT细胞中E-cadherin和β-catenin的分布异常,其机制可能是通过阻断FAK磷酸化及其通路而实现.
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