【摘 要】
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目的 应用抑制消减杂交技术克隆胰腺癌差异表达基因.方法 提取胰腺癌和癌旁正常胰腺组织中的RNA和mRNA并合成双链eDNA,经Rsa 1酶切后,将胰腺癌双链eDNA分为2组,分别加上不同
【机 构】
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重庆三峡医药高等专科学校第二附属医院内三科,404000;
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目的 应用抑制消减杂交技术克隆胰腺癌差异表达基因.方法 提取胰腺癌和癌旁正常胰腺组织中的RNA和mRNA并合成双链eDNA,经Rsa 1酶切后,将胰腺癌双链eDNA分为2组,分别加上不同的接头,再与正常胰腺组织eDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物克隆至T/A载体,并转化大肠杆菌TOP IOF构建消减eDNA文库.随机挑选有插入片段的阳性克隆进行测序及同源性分析.结果 文库扩增后得到251个白色克隆,随机挑取53个白色克隆进行PCR扩增分析,其中50个克隆有插入片段,克隆阳性率为96%.片段大小主要集中在300～600 bp之间.对50个有插入片段的阳性克隆进行测序,得到45个可用序列.同源性分析发现44个为已知基因,1个为无任何功能线索的未知基因,可能代表了新基因.结论 应用SSH技术成功构建了人胰腺癌抑制消减eDNA文库,并筛选出1条差异表达基因可能为新的胰腺癌相关基因.为进一步研究胰腺癌发生,发展的分子机量提供了新的线索.
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