三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

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从三角酵母中提取总RNA,反转录后进行PCR扩增得到D-氨基酸氧化酶 (D-Amino Acid Oxidase, DAAO)基因,经测序可知,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在99%以上.将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后,与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET-28a连接,转化大肠杆菌TOP-10F′,并筛选得到重组质粒pET-DAAO,转化BL21(DE3)感受态细胞,得到重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-DAAO.对重组大肠杆菌中的D-氨基酸氧化酶进行了诱导表达,考察了诱导温
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