【摘 要】
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目的 观察经苯代谢物长期处理的K562细胞在撤出苯代谢物后,继续传代培养时的红系分化能力的变化规律。方法 K562细胞分别以5μmol/L 1,2,4-苯三醇和10μmol/L氢醌处理4周,每周以联苯胺染色法检测受处理细胞Hemin诱导的红系分化率,评价红系分化能力;处理满4周后,撤出苯代谢物,一部分细胞继续传代培养,持续12周,每2周测定细胞的红系分化能力,另一部分细胞进行单细胞克隆培养,选取红
【机 构】
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北京航空航天大学生物与医学工程学院生物医学工程高精尖创新中心
【基金项目】
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国家自然科学基金(81573192,81072325);
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目的 观察经苯代谢物长期处理的K562细胞在撤出苯代谢物后,继续传代培养时的红系分化能力的变化规律。方法 K562细胞分别以5μmol/L 1,2,4-苯三醇和10μmol/L氢醌处理4周,每周以联苯胺染色法检测受处理细胞Hemin诱导的红系分化率,评价红系分化能力;处理满4周后,撤出苯代谢物,一部分细胞继续传代培养,持续12周,每2周测定细胞的红系分化能力,另一部分细胞进行单细胞克隆培养,选取红系分化能力较低的细胞株连续传代培养,每2周测定各细胞株红系分化能力。结果 在处理的前3周,苯三醇组和氢醌组K562细胞红系分化能力出现时间依赖性下降,而在处理3和4周后,苯三醇组红系分化率均分别只有对照组的51.1%和50.1%,氢醌组均只有对照组的33.1%和31.4%。4周处理后,洗去苯代谢物,在继续传代培养的前6周,苯三醇组和氢醌组红系分化率均分别稳定地维持在22.3%~23.9%和14.0%~15.6%范围内,此后逐渐回升,但仍然明显低于对照组。经苯代谢物处理4周后再经4周的单细胞克隆培养,获得单细胞起源克隆细胞株,各组来源的细胞克隆的红系分化率分别为:对照组39.1%~49.7%,平均45.7%;苯三醇组4.1%~45.3%,平均20.6%;氢醌组0.8%~28.9%,平均12.7%。如将红系分化率≤10%的单克隆细胞株进行第1轮继续传代培养2周,苯三醇组和氢醌组来源细胞株的平均红系分化率仅有小幅回升。如每处理组每批次各挑选出3个红系分化能力最低的单克隆细胞株,再进行第2轮继续传代培养2周,则单克隆细胞株在刚克隆出来时、第1次和第2次继续传代培养后的平均红系分化率,在苯三醇组来源细胞株中分别为7.5%、8.4%和16.3%,在氢醌组来源细胞株中分别为2.3%、3.4%和7.5%。从每处理组的每批次克隆细胞株中选取红系分化能力最低的细胞株,进行4轮连续传代培养,经最初4周的单细胞克隆培养后、第1次、第2次、第3次和第4次2周继续传代培养后的平均平均红系分化率,在来自苯三醇组的细胞株中分别为6.4%、7.6%、12.8%、16.5%和19.4%,在来自氢醌组的细胞株中分别为1.5%、1.7%、4.9%、7.7%、11.5%。结论 苯代谢物长期处理造成K562细胞红系分化能力下降后,即使没有苯代谢物存在,这种红系分化能力的低下可维持相当长的时间;苯代谢物处理的K562细胞群体中几乎所有单个细胞红系分化能力的下降,只是每个细胞红系分化能力的下降程度有所不同。
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