【摘 要】
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使用siRNA沉默大鼠心肌细胞的MagT1,检测细胞凋亡情况及机制、高浓度Mg2+对于细胞凋亡的拯救情况.将MagT1 siRNA转入原代培养大鼠心肌细胞沉默MagT1,随后使用RT-PCR和Western
【机 构】
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盐城市江苏医药职业学院基础医学部,盐城,224005;潍坊市潍坊护理职业学院医学基础部,潍坊,261041
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使用siRNA沉默大鼠心肌细胞的MagT1,检测细胞凋亡情况及机制、高浓度Mg2+对于细胞凋亡的拯救情况.将MagT1 siRNA转入原代培养大鼠心肌细胞沉默MagT1,随后使用RT-PCR和Western blotting法检测MagT1 mRNA和蛋白质表达情况,荧光显微镜检测细胞内线粒体膜电位变化情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和Caspase-9情况.相比阴性siRNA组,MagT1 siRNA转染大鼠心肌细胞48 h后,MagT1 mRNA的沉默效率为52.06％ (p＜0.05),MagT1蛋白质的沉默效率为57.15％ (p＜0.05),细胞凋亡率为31.26％ (p＜0.01),高Mg2拯救组凋亡率为22.78％ (p＜0.01),线粒体膜电位水平降低22.03％ (p＜0.05),caspase-9表达水平升高7.93％ (p＞0.05);MagT1 siRNA转染大鼠心肌细胞60 h后,MagT1 mRNA的沉默效率为87.24％ (p＜0.01),MagT1蛋白质的沉默效率为84.45％ (p＜0.01),细胞凋亡率为40.64％(p＜0.01),高Mg2+拯救组凋亡率为26.62％ (p＜0.01),线粒体膜电位水平降低34.24％ (p＜0.01),caspase-9表达水平升高19.15％ (p＜0.05).本研究发现MagT1被显著沉默后,大鼠心肌细胞内Mg2+浓度下降通过线粒体途径诱发了细胞凋亡,提升大鼠心肌细胞内Mg2浓度可以一定程度拯救凋亡.
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