研究百日咳毒素 (PTX) 对G蛋白偶联ER (GPER) 介导的雌激素激活的子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞中磷脂酰肌醇3激酶 (PI3K) /蛋白激酶B (Akt) 信号通路的影响。

采用免疫组化SP法检测Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER蛋白的表达。将不同浓度 (0、0.1、0.5、1.0μg/ml) 的PTX分别处理Ishikawa和HEC-1 A细胞30 min后,再予上述浓度的PTX分别联合17β雌二醇 (17β-E₂;1×10-6 mol/L) 共同处理HEC-1A细胞15 min、Ishikawa细胞30 min,采用蛋白印迹法检测Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER、ERα、ERβ蛋白的表达及Akt的活化状态[Akt的活化状态以磷酸化Akt (p-Akt) /Akt表示]。

(1) 免疫组化法检测显示,在Ishikawa和HEC-1 A细胞中GPER蛋白均在细胞质中呈棕黄色阳性表达。 (2) 蛋白印迹法检测显示,不同浓度 (0、0.1、0.5、1.0μg/ml) 的PTX联合17β-E₂ (1×10-6 mol/L) 处理后,在Ishikawa细胞中,p-Akt/ Akt分别为0.74±0.54、0.34±0.06、0.18±0.03、0.07±0.15,GPER蛋白的表达水平分别为0.872±0.490、0.395±0.054、0.145±0.014、0.034±0.008,随着PTX浓度的增加,p-Akt/ Akt、GPER蛋白的表达水平均明显下降 (P<0.05),且当PTX浓度为1.0μg/ml时下降最显著 (F=63.729,P=0.0001;F=160.284,P=0.0001) ;而ERα和ERβ蛋白的表达水平均无明显变化 (P>0.05) 。在HEC-1A细胞中,p-Akt/Akt分别为0.73±0.09、0.26±0.14、0.11±0.03、0,GPER蛋白的表达水平分别为0.927±0.134、0.485±0.022、0.194±0.004、0,随着PTX浓度的增加,p-Akt/ Akt、GPER蛋白的表达水平均明显下降 (P<0.05),且当PTX浓度为1.0μg/ml时均降至0 (F=1039.321,P=0.0001;F=109.646,P=0.0001) ;而ERα蛋白的表达水平无明显变化 (P>0.05),ERβ蛋白呈阴性表达。

在子宫内膜癌HEC-1A和Ishikawa细胞中,PTX阻断GPER后,可抑制雌激素对子宫内膜癌细胞PI3K/Akt信号通路的活化作用。