【摘 要】
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目的 纯化铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)溶血素共调节蛋白(Hemolysin co-regulated protein,Hcp)并制备抗血清. 方法 从NCBI网站查到铜绿假单胞菌Hcp蛋白序列,采用Si
【机 构】
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南华大学附属第二医院重症医学科,湖南衡阳,421001;南华大学病原生物学研究所
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目的 纯化铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)溶血素共调节蛋白(Hemolysin co-regulated protein,Hcp)并制备抗血清. 方法 从NCBI网站查到铜绿假单胞菌Hcp蛋白序列,采用Signal IP 4.1预测定位及信号肽情况;登录Swiss model网站预测三级结构情况;登录www.iedb.org网站预测其B细胞表位.根据Hcp基因序列设计特异性引物,以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增Hcp基因,经双酶切后连到pET28a.将重组质粒pET28a-Hcp转化大肠埃希菌BL21 (DE3),然后用IPTG诱导重组Hcp蛋白表达.使用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白.用Hcp蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗血清效价. 结果 Hcp定位在细菌细胞浆,无信号肽,6个单体蛋白组成一个环状的中空结构,含有多个B细胞表位.构建的表达质粒pET28a-Hcp能表达23.9×103大小的Hcp蛋白,镍柱层析后得到高纯度的Hcp蛋白,重组Hcp蛋白诱导的抗体效价大于1∶10 240. 结论 成功重组表达铜绿假单胞菌Hcp蛋白及高滴度的抗血清,为研究Hcp的功能奠定了实验基础.
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