【摘 要】
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目的建立自然杀伤细胞(NK)的分离、培养方法,并检测其杀伤活性。方法抽取健康人外周血20ml,采用淋巴分离液分离单个核细胞,再用苯丙氨酸甲酯(PME)去除单核巨噬细胞、B细胞,从
【机 构】
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昆明总医院干细胞与组织工程研究中心,昆明总医院检验科,
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目的建立自然杀伤细胞(NK)的分离、培养方法,并检测其杀伤活性。方法抽取健康人外周血20ml,采用淋巴分离液分离单个核细胞,再用苯丙氨酸甲酯(PME)去除单核巨噬细胞、B细胞,从而纯化单个核细胞。培养3~5h,收集黏附于培养板底部表面的细胞(即A-NK细胞),重新培养2周。实验过程中用显微镜观察细胞形态,用流式细胞术检测标志性抗原,用MTT法检测杀伤率。结果单个核细胞在诱导的第3天开始出现集落,第7天时集落达到高峰。流式细胞术检测第7天的表面抗原,CD3-为96.5﹪,CD3-中CD16+和CD56+双阳性的占31﹪。MTT法检测诱导培养的第1天和第4天的杀伤率,效靶比在20:1时杀伤率最高分别是(58.86±4.12)﹪和(54.42±3.02)﹪;当检测第7天,效靶比在5:1时杀伤率最高(46.71±3.41)﹪;第10天,效靶比在10:1时杀伤率最高(63.27±3.18)﹪;检测第14天,效靶比在5:1的情况下,杀伤率是最高(72.63±2.65)﹪。结论本实验室通过贴壁和诱导的方法可以快速获得纯度高、杀伤活性强的NK细胞。
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