【摘 要】
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目的建立人乳酸脱氢酶B(LDHB)体外抑制剂筛选模型。方法用一对5’端分别带NdeⅠ、XhoⅠ位点的引物扩增LDHB cDNA。LDHB cDNA经NdeⅠ+XhoⅠ双酶切后与同样酶切的pET-28a质粒连
【机 构】
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湖北科技学院医药研究院,湖北省咸宁市妇幼保健院妇产科,湖北科技学院护理学院
【基金项目】
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湖北科技学院糖尿专项开放课题(07903/170136)
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目的建立人乳酸脱氢酶B(LDHB)体外抑制剂筛选模型。方法用一对5’端分别带NdeⅠ、XhoⅠ位点的引物扩增LDHB cDNA。LDHB cDNA经NdeⅠ+XhoⅠ双酶切后与同样酶切的pET-28a质粒连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α。将筛选的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.2 mmol/L IPTG诱导LDHB表达,镍离子亲和层析柱纯化LDHB。以丙酮酸钠和NADH为底物,通过检测340 nm波长处光密度值的变化,确定LDHB及其抑制剂棉酚的最适浓度,并计算模型的Z因子。结果 LDHB的表达量为25 mg/L,LDHB、棉酚的最适浓度分别为22.5μg/L、10μmol/L,筛选模型的Z因子为0.91。结论建立了成本低、可靠性强、适合高通量的LDHB体外抑制剂筛选模型。
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