目的 了解自贡市第一人民医院临床分离菌对抗菌药物的耐药性，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法 收集我院2020—2022年临床分离菌株，采用VITEK自动化鉴定及药敏系统、纸片扩散法及E-test方法进行细菌鉴定及药物敏感试验，以2022年美国临床和实验室标准化协会（CLSI）折点标准判断结果。结果 共分离出临床菌株13324株，其中革兰阴性菌占69.6%，革兰阳性菌占30.4%。前五位分离菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和流感嗜血杆菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的检出率分别为24.1%和73.0%。耐利奈唑胺屎肠球菌和粪肠球菌的检出率分别为2.1%和12.4%，分离出1株耐万古霉素的屎肠球菌。脑脊液中分离的4株肺炎链球菌均为青霉素非敏感菌株，未检出非脑脊液来源耐青霉素肺炎链球菌。耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌的检出率为12.3%。而耐碳青霉烯类大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率低，分别为1.1%和2.9%。铜绿假单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟和庆大霉素的耐药率逐年增加；鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物耐药率明显高于铜绿假单胞菌，耐碳青霉烯类菌株检出率分别为41.9%和6.9%。未分离出耐头孢噻肟的流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌。结论 临床分离菌以革兰阴性菌为主，常见分离菌的耐药率呈现平稳或略有降低的特点。然而，耐利奈唑胺粪肠球菌和耐阿莫西林/克拉维酸流感嗜血杆菌检出率明显升高，应加强医院感染防控措施和抗菌药物的合理使用。