【摘 要】
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目的构建PRELP(proline/arginine-rich end leucine-rich repeat protein)基因sh RNA慢病毒表达载体,并对其在Saos-2细胞中沉默效果进行鉴定。方法针对PRELP m RNA设计2对干
【机 构】
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山东省医药生物技术研究中心卫生部医药生物技术重点实验室山东省医学科学院; 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81371909);十二五国家科技支撑计划(2013BAI07B01)
论文部分内容阅读
目的构建PRELP(proline/arginine-rich end leucine-rich repeat protein)基因sh RNA慢病毒表达载体,并对其在Saos-2细胞中沉默效果进行鉴定。方法针对PRELP m RNA设计2对干扰序列,化学合成后插入至慢病毒载体,将慢病毒载体以不同MOI值分别转染Saos-2细胞,筛选细胞内GFP阳性率最高MOI值。将合成的慢病毒载体以筛选出的MOI值分别转染细胞,嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,Western blot法验证两株稳定转染细胞株PRELP下调效率。结果成功构建PRELP sh RNA慢病毒载体,当MOI为50~70时,细胞内荧光蛋白表达阳性率最高;嘌呤霉素筛选到稳定转染的细胞株;构建的稳转细胞系均特异性抑制PRELP蛋白的表达。结论成功构建了PRELP sh RNA慢病毒载体,并建立稳定的Saos-2细胞PRELP下调表达细胞模型,为研究PRELP在骨关节炎中的作用奠定了基础。
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