【摘 要】
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根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子,采用基因半合成技术合成人胰岛素基因.将合成的胰岛素基因克隆到pPIK9质粒,构建了毕赤(Pichia)酵母重组表达载体pPINS319,用Bgl
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子,采用基因半合成技术合成人胰岛素基因.将合成的胰岛素基因克隆到pPIK9质粒,构建了毕赤(Pichia)酵母重组表达载体pPINS319,用BglⅡ线性化后用电转化法导入毕赤酵母GSll5菌株,经过营养筛选和PCR复筛,得到含人胰岛素基因的毕赤酵母工程菌株.经SDS-PAGR和密度扫描分析表明,合成的人胰岛素基因能够在毕赤酵母中高效分泌性表达,表达量可达0.563 mg/mL,表达产物无需转肽过程,只经过胰蛋白酶和羧肽酶B简单处理即得到优质重组人胰岛素,其体内活力约为30 IU/mg.
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