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【摘 要】 目的：建立高效液相色谱法测定感冒疏风片中芍药苷的含测方法。方法：色谱柱为Agilent SB-C18 （4.6 mm×250 mm，5μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶88），流速为1.0mL·min-1，柱温为30℃，检测波长为230 nm。结果： HPLC法测定芍药苷在0.19694～3.9388μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为97.64%，RSD为1.26%。结论：该方法操作简便、结果准确可靠、专属性及重现性好，可用于有效地控制感冒疏风片的质量。
【关键词】 HPLC;感冒疏风片;芍药苷;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）13-0067-02
感冒疏风片是由麻黄绒、苦杏仁、桂枝、防风、白芍、紫苏叶、甘草、桔梗、独活、大枣、生姜、炒谷芽等12种中药组成的复方制剂，具有辛温解表、宣肺和中的功效，用于治疗风寒感冒，发热咳嗽，头痛怕冷，鼻流清涕，骨节酸痛，四肢疲倦的症状。现行质量标准（卫生部药品标准中药成方制剂，第 11 册）只有片剂项下的常规检查项， 无含量测定项目，不能全面有效控制该药品的内在质量和疗效[1-2]。白芍为本方中的君药，白芍的活性成分为白芍总苷，其芍药苷是白芍总苷的重要有效成分[3]。芍药苷paeoniflorin是白芍的主要有效成分，属于一种天然水溶性单萜类糖苷[4]，具有抗炎镇痛、抑菌、解热、抗抑郁、神经保护、抗肿瘤、调节免疫、肝保护、心脏保护等药理作用。通过对感冒疏风片中芍药苷含量测定方法的研究，为全面评价感冒疏风片的质量提供简便快速、准确可靠的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 The Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪;PM4-1300TL超声仪;UV-2550紫外可见分光光度计;Sartorius CPA225D电子分析天平（十万分之一）;Sartorius BS224S电子分析天平（万分之一）。
1.2 试药 感冒疏风片（批号490251、490005、490041、480862）由昆明中药厂有限公司提供;（批号190116）由云南腾药制药有限公司提供;芍药苷对照品（110736-201842）（含量以97.4%计）由中国药品生物制品检定研究院提供。实验用的乙腈为色谱纯、由美国默克公司生产;水为娃哈哈纯净水;乙醇，磷酸等其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶88）;流速为1.0mL·min-1，检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计应不低于2000。
2.2 对照品溶液制备 精密称取芍药苷对照品10.11 mg （含量以97.4%计），加入甲醇CH3OH定容至100 mL，制得每1 mL含0.09847mg的芍药苷对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备 取感冒疏风片20片，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再次称定重量，用稀乙醇补足减失的失重，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.4 阴性样品溶液制备 根据处方制备缺白芍的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液，即得。
2.5 专属性试验 依据2.1项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液各10 μL，测定。结果表明，在与对照品溶液色谱图相应保留时间处，供试品溶液有芍药苷特征吸收峰，而阴性对照液无相应吸收峰，表明专属性良好。如图 1～3所示。
2.6 线性关系的考察 精密吸取芍药苷对照品溶液（0.09847 mg/mL）2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、30 μL、40 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），以测得峰面积为纵坐标（Y），线性回归，即得回归方程为：Y=142786127X-6127091，R2=1.00。线性范围：0.19694～3.9388μg，结果表明线性关系良好。
2.7 精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液（0.09847 mg/mL）10 μL，连续进样6次，测定芍药苷峰面积，结果峰面积RSD为0.3%，说明仪器精密度良好。
2.8 重复性考察 取同一批号（批号：490251）样品6份，按上述“2.3”项下供试品溶液制备方法， 平行处理并测定， 结果6次测得芍药苷平均含量为6.8336 mg/g，RSD为0.49% ，表明重复性良好。
2.9 稳定性考察 按上述“2.3”项下方法制备供试品溶液，室温条件下每2 h进样1次，以峰面积计算， RSD（n=7）为1.40%。结果表明室温条件下，供试品溶液中芍药苷在12 h内基本稳定。
2.10 准确度考察 精密称取6份已知含量（6.8336 mg/g）供试品（批号490251）各约0.5 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入芍药苷对照品溶液（浓度0.6654 mg/mL）5 mL， 按上述“2.3”项下方法制备所需溶液，照含量测定方法项下操作，测定供试品溶液中芍药苷的含量，计算芍药苷的平均回收率（n=6）为97.64%;RSD为0.91%;结果表明方法准确度良好。见表1。
2.11 样品测定 按上述色谱条件，依法测定5批样品中芍药苷的含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择 感冒疏风片处方中所含成分复杂，为了将芍药苷与其他成分较好的分离，参考文献，采用2种不同流动相：①乙腈-水和②乙腈-0.1%磷酸溶液，试验结果表明：流动相①分离效果不好;流动相②样品能获得较好的分离，且得到对称性较好的芍药苷峰;对流动相②比例进行调整发现乙腈：0.1%磷酸溶液（12∶88）条件下，分离效果最佳。
3.2 提取条件的选择 采用稀乙醇，甲醇，50%甲醇为提取溶剂，试验结果表明，当提取溶剂为稀乙醇时，提取效果最好，故选用稀乙醇。实验通过对稀乙醇超声提取30 min、加热回流提取30 min、索氏提取2 h及3 h比较，其中索氏提取2h含量最低，索氏提取3 h含量接近超声提取30 min和加热回流提取30 min;超声提取效果較好且简便快捷，故选用超声提取30 min。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准·中药成方制剂（第十一册）[S].北京：人民卫生出版社，1990.
[2]国家药典委员会.中华人民国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：149-150.
[3]冯伟科，郭平.芍药苷药理作用研究进展[J].山东中医杂志，2019，38（1）：105-108.
[4]张育贵，张淑娟，边甜甜，等.芍药苷药理作用研究最新进展[J].中草药，2019，50（15）3735-3740.
（收稿日期：2020-12-08 编辑：陶希睿）
【关键词】 HPLC;感冒疏风片;芍药苷;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）13-0067-02
感冒疏风片是由麻黄绒、苦杏仁、桂枝、防风、白芍、紫苏叶、甘草、桔梗、独活、大枣、生姜、炒谷芽等12种中药组成的复方制剂，具有辛温解表、宣肺和中的功效，用于治疗风寒感冒，发热咳嗽，头痛怕冷，鼻流清涕，骨节酸痛，四肢疲倦的症状。现行质量标准（卫生部药品标准中药成方制剂，第 11 册）只有片剂项下的常规检查项， 无含量测定项目，不能全面有效控制该药品的内在质量和疗效[1-2]。白芍为本方中的君药，白芍的活性成分为白芍总苷，其芍药苷是白芍总苷的重要有效成分[3]。芍药苷paeoniflorin是白芍的主要有效成分，属于一种天然水溶性单萜类糖苷[4]，具有抗炎镇痛、抑菌、解热、抗抑郁、神经保护、抗肿瘤、调节免疫、肝保护、心脏保护等药理作用。通过对感冒疏风片中芍药苷含量测定方法的研究，为全面评价感冒疏风片的质量提供简便快速、准确可靠的方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 The Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪;PM4-1300TL超声仪;UV-2550紫外可见分光光度计;Sartorius CPA225D电子分析天平（十万分之一）;Sartorius BS224S电子分析天平（万分之一）。
1.2 试药 感冒疏风片（批号490251、490005、490041、480862）由昆明中药厂有限公司提供;（批号190116）由云南腾药制药有限公司提供;芍药苷对照品（110736-201842）（含量以97.4%计）由中国药品生物制品检定研究院提供。实验用的乙腈为色谱纯、由美国默克公司生产;水为娃哈哈纯净水;乙醇，磷酸等其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶88）;流速为1.0mL·min-1，检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计应不低于2000。
2.2 对照品溶液制备 精密称取芍药苷对照品10.11 mg （含量以97.4%计），加入甲醇CH3OH定容至100 mL，制得每1 mL含0.09847mg的芍药苷对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备 取感冒疏风片20片，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再次称定重量，用稀乙醇补足减失的失重，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.4 阴性样品溶液制备 根据处方制备缺白芍的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液，即得。
2.5 专属性试验 依据2.1项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性样品溶液各10 μL，测定。结果表明，在与对照品溶液色谱图相应保留时间处，供试品溶液有芍药苷特征吸收峰，而阴性对照液无相应吸收峰，表明专属性良好。如图 1～3所示。
2.6 线性关系的考察 精密吸取芍药苷对照品溶液（0.09847 mg/mL）2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、30 μL、40 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），以测得峰面积为纵坐标（Y），线性回归，即得回归方程为：Y=142786127X-6127091，R2=1.00。线性范围：0.19694～3.9388μg，结果表明线性关系良好。
2.7 精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液（0.09847 mg/mL）10 μL，连续进样6次，测定芍药苷峰面积，结果峰面积RSD为0.3%，说明仪器精密度良好。
2.8 重复性考察 取同一批号（批号：490251）样品6份，按上述“2.3”项下供试品溶液制备方法， 平行处理并测定， 结果6次测得芍药苷平均含量为6.8336 mg/g，RSD为0.49% ，表明重复性良好。
2.9 稳定性考察 按上述“2.3”项下方法制备供试品溶液，室温条件下每2 h进样1次，以峰面积计算， RSD（n=7）为1.40%。结果表明室温条件下，供试品溶液中芍药苷在12 h内基本稳定。
2.10 准确度考察 精密称取6份已知含量（6.8336 mg/g）供试品（批号490251）各约0.5 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入芍药苷对照品溶液（浓度0.6654 mg/mL）5 mL， 按上述“2.3”项下方法制备所需溶液，照含量测定方法项下操作，测定供试品溶液中芍药苷的含量，计算芍药苷的平均回收率（n=6）为97.64%;RSD为0.91%;结果表明方法准确度良好。见表1。
2.11 样品测定 按上述色谱条件，依法测定5批样品中芍药苷的含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择 感冒疏风片处方中所含成分复杂，为了将芍药苷与其他成分较好的分离，参考文献，采用2种不同流动相：①乙腈-水和②乙腈-0.1%磷酸溶液，试验结果表明：流动相①分离效果不好;流动相②样品能获得较好的分离，且得到对称性较好的芍药苷峰;对流动相②比例进行调整发现乙腈：0.1%磷酸溶液（12∶88）条件下，分离效果最佳。
3.2 提取条件的选择 采用稀乙醇，甲醇，50%甲醇为提取溶剂，试验结果表明，当提取溶剂为稀乙醇时，提取效果最好，故选用稀乙醇。实验通过对稀乙醇超声提取30 min、加热回流提取30 min、索氏提取2 h及3 h比较，其中索氏提取2h含量最低，索氏提取3 h含量接近超声提取30 min和加热回流提取30 min;超声提取效果較好且简便快捷，故选用超声提取30 min。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准·中药成方制剂（第十一册）[S].北京：人民卫生出版社，1990.
[2]国家药典委员会.中华人民国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：149-150.
[3]冯伟科，郭平.芍药苷药理作用研究进展[J].山东中医杂志，2019，38（1）：105-108.
[4]张育贵，张淑娟，边甜甜，等.芍药苷药理作用研究最新进展[J].中草药，2019，50（15）3735-3740.
（收稿日期：2020-12-08 编辑：陶希睿）