【摘 要】
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限制-修饰系统（RMS）是细菌为了防御外来DNA入侵而进化产生的一种保护机制。RMS系统可分为I型、II型、III型和IV型。Asc I是一种II型限制性核酸内切酶，能识别8-bp DNA基序。尽管Asc I已经被广泛应用于分子克隆研究中，然而目前尚无关于Asc I蛋白质的表达、纯化以及结构机制等方面的研究报道。本研究基于大肠杆菌重组表达体系建立了Asc I重组蛋白质的高效表达和纯化方法，从每升细
【机 构】
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福州大学化学学院生物药光动力国家地方联合工程中心
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.31971222）资助；
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限制-修饰系统（RMS）是细菌为了防御外来DNA入侵而进化产生的一种保护机制。RMS系统可分为I型、II型、III型和IV型。Asc I是一种II型限制性核酸内切酶，能识别8-bp DNA基序。尽管Asc I已经被广泛应用于分子克隆研究中，然而目前尚无关于Asc I蛋白质的表达、纯化以及结构机制等方面的研究报道。本研究基于大肠杆菌重组表达体系建立了Asc I重组蛋白质的高效表达和纯化方法，从每升细菌培养物中可获得约2.5 mg纯度大于95%的Asc I蛋白质。进一步的酶学性质研究表明，Asc I酶切反应的最适温度是37℃，最适pH为7.5～8.5，反应依赖于Mg2+和Mn2+等二价金属离子。基于小角X射线散射（SAXS）分析技术，我们还建立了Asc I蛋白质及其与底物DNA复合物在溶液状态下的三维空间模型，并结合点突变对该模型进行了验证。总之，本研究对Asc I蛋白质的重组表达、纯化、酶活性质以及结构机制进行了比较系统地研究，为了解RMS系统的工作机制提供了结构基础，同时也为Asc I作为分子克隆工具酶的进一步开发和改造提供了理论依据。
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