论文部分内容阅读
摘 要：头孢氨苄缓释片含量测定方法多为滴定法。本文用高效液相法对头孢氨苄缓释片中的头孢氨苄的进行了含量测定。固定相为：依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u），乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相，检测波长为260nm；头孢氨苄在5～65μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。头孢氨苄的平均回收率为99.5%。本法简便、重现性好、回收率高，可用于头孢氨苄缓释片中头孢氨苄的含量测定。
关键词：头孢氨苄缓释片；头孢氨苄；测定
头孢氨苄化学名为（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。药理头孢氨苄属第一代头孢菌素抗菌谱与头孢噻吩相仿，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、各组链球菌、肺炎球菌以及部分大肠杆菌、克雷伯氏菌属、奇异变形杆菌以及流感杆菌具有较好的抗菌活性。头孢氨苄缓释片适用于金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、流感杆菌、痢疾杆菌等敏感菌株引起的慢性肾盂肾炎、膀胱炎、前列腺炎、脸炎、急性泪囊炎、毛囊炎、牙槽脓肿、根尖性牙周炎、智齿周围炎、外耳炎、鼻窦炎、扁桃体周炎、咽喉炎、支气管炎、皮下脓肿、创伤感染、淋巴管炎等。头孢氨苄缓释片含量测定方法多为滴定法。本文用高效液相法对头孢氨苄缓释片中的头孢氨苄的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：海能LC7000四元低压梯度系统（济南海能仪器股份有限公司）；Lambda950紫外可见分光光度计（珀金埃尔默仪器（上海）有限公司）；FA2104电子分析天平（西安禾普生物科技有限公司）； PHS-3C数字酸度计（上海佑科仪器仪表有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；BL10-250C双频加热型超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；制冷和加热循环槽（上海汗诺仪器有限公司）；Molresearch摩尔分析型超纯水机系列（上海摩勒科学仪器有限公司）。
1.2 试药：乙腈（上海源景化学品有限公司）、甲醇（江西省新干县金成化工厂）、冰乙酸（上海信合化工有限公司）、磷酸（山东省博兴县凯利精细化工有限责任公司）、盐酸（山东省博兴县凯利精细化工有限责任公司）、磷酸氢二铵（淄博市淄川区鑫川化工厂）、冰醋酸（银川镇扬化工有限公司）、四氢呋喃（上海源景化学品有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相；检测波长为260nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按头孢氨苄峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取头孢氨苄缓释片适量，研细，精密称定至容量瓶内，加适量流动相超声溶解，放凉，用流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取头孢氨苄对照品约5mg，置50毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含头孢氨苄10μg）。
2.4 阴性干扰试验：按方中比例取头孢氨苄缓释片辅料，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与头孢氨苄相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5 标准曲线的制备
制备浓度为5μg·mL-1、15μg·mL-1、25μg·mL-1、35μg·mL-1、45μg·mL-1、55μg·mL-1、65μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，头孢氨苄对照品在5～65μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
精密吸取头孢氨苄对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批头孢氨苄缓释片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.66%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品头孢氨苄峰面积积分值的RSD为0.62%。结果表明头孢氨苄至少在4h内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的头孢氨苄对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.83%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢氨苄缓释片三批样品中头孢氨苄的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的99.9%、99.6%、99.8%。
3 讨论
头孢氨苄测定方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法、流动注射化学发光法、傅里叶自解卷积红外光谱定量分析法等[1-5]。头孢氨苄缓释片含量测定方法多为滴定法。本文采用高效液相法对头孢氨苄缓释片中的头孢氨苄的进行了含量测定。分别考察乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1），0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH到3.0）-乙腈（20∶80），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（18：12：70∶0.1），乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：20：55∶0.1），乙腈-甲醇-四氢呋喃-水（10：15：35∶40）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定头孢氨苄缓释片含量的方法。头孢氨苄缓释片中头孢氨苄的含量为标示量的95-105%。
参考文献
[1]陈麒，唐玉海，孙媛媛，姚宏.流动注射化学发光法检测头孢氨苄[J].兰州医学院学报，2004（1）.
[2]谢笑英.紫外分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量[J].现代诊断与治疗，2005（5）.
[3]王菊荣，刘丽岚.紫外分光光度法测定头孢氨苄胶囊的含量[J].解放军药学学报，2002（4）.
[4]赵明，孙炜欣，朱文军.高效液相色谱法测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄的含量[J].中国药业，2003（10）.
[5]朱晓军，程存归，陈彬.傅里叶自解卷积红外光谱定量分析法测定头孢氨苄[J].中国医院药学杂志，2004（4）.
关键词：头孢氨苄缓释片；头孢氨苄；测定
头孢氨苄化学名为（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸-水合物。药理头孢氨苄属第一代头孢菌素抗菌谱与头孢噻吩相仿，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、各组链球菌、肺炎球菌以及部分大肠杆菌、克雷伯氏菌属、奇异变形杆菌以及流感杆菌具有较好的抗菌活性。头孢氨苄缓释片适用于金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、流感杆菌、痢疾杆菌等敏感菌株引起的慢性肾盂肾炎、膀胱炎、前列腺炎、脸炎、急性泪囊炎、毛囊炎、牙槽脓肿、根尖性牙周炎、智齿周围炎、外耳炎、鼻窦炎、扁桃体周炎、咽喉炎、支气管炎、皮下脓肿、创伤感染、淋巴管炎等。头孢氨苄缓释片含量测定方法多为滴定法。本文用高效液相法对头孢氨苄缓释片中的头孢氨苄的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：海能LC7000四元低压梯度系统（济南海能仪器股份有限公司）；Lambda950紫外可见分光光度计（珀金埃尔默仪器（上海）有限公司）；FA2104电子分析天平（西安禾普生物科技有限公司）； PHS-3C数字酸度计（上海佑科仪器仪表有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；BL10-250C双频加热型超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；制冷和加热循环槽（上海汗诺仪器有限公司）；Molresearch摩尔分析型超纯水机系列（上海摩勒科学仪器有限公司）。
1.2 试药：乙腈（上海源景化学品有限公司）、甲醇（江西省新干县金成化工厂）、冰乙酸（上海信合化工有限公司）、磷酸（山东省博兴县凯利精细化工有限责任公司）、盐酸（山东省博兴县凯利精细化工有限责任公司）、磷酸氢二铵（淄博市淄川区鑫川化工厂）、冰醋酸（银川镇扬化工有限公司）、四氢呋喃（上海源景化学品有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u ）；乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相；检测波长为260nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按头孢氨苄峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取头孢氨苄缓释片适量，研细，精密称定至容量瓶内，加适量流动相超声溶解，放凉，用流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取头孢氨苄对照品约5mg，置50毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含头孢氨苄10μg）。
2.4 阴性干扰试验：按方中比例取头孢氨苄缓释片辅料，按照制备工艺方法制成阴性制剂，按2.3项下方法制成供试品溶液，按色谱条件测定。结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与头孢氨苄相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5 标准曲线的制备
制备浓度为5μg·mL-1、15μg·mL-1、25μg·mL-1、35μg·mL-1、45μg·mL-1、55μg·mL-1、65μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，头孢氨苄对照品在5～65μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
精密吸取头孢氨苄对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批头孢氨苄缓释片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.66%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品头孢氨苄峰面积积分值的RSD为0.62%。结果表明头孢氨苄至少在4h内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的头孢氨苄对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.83%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢氨苄缓释片三批样品中头孢氨苄的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的99.9%、99.6%、99.8%。
3 讨论
头孢氨苄测定方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法、流动注射化学发光法、傅里叶自解卷积红外光谱定量分析法等[1-5]。头孢氨苄缓释片含量测定方法多为滴定法。本文采用高效液相法对头孢氨苄缓释片中的头孢氨苄的进行了含量测定。分别考察乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1），0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH到3.0）-乙腈（20∶80），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67），乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（18：12：70∶0.1），乙腈-甲醇-水-冰醋酸（25：20：55∶0.1），乙腈-甲醇-四氢呋喃-水（10：15：35∶40）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（8：12：80∶0.1）为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定头孢氨苄缓释片含量的方法。头孢氨苄缓释片中头孢氨苄的含量为标示量的95-105%。
参考文献
[1]陈麒，唐玉海，孙媛媛，姚宏.流动注射化学发光法检测头孢氨苄[J].兰州医学院学报，2004（1）.
[2]谢笑英.紫外分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄的含量[J].现代诊断与治疗，2005（5）.
[3]王菊荣，刘丽岚.紫外分光光度法测定头孢氨苄胶囊的含量[J].解放军药学学报，2002（4）.
[4]赵明，孙炜欣，朱文军.高效液相色谱法测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄的含量[J].中国药业，2003（10）.
[5]朱晓军，程存归，陈彬.傅里叶自解卷积红外光谱定量分析法测定头孢氨苄[J].中国医院药学杂志，2004（4）.