【摘 要】
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旨在研究类弹性蛋白[I]40(elastin-like polypeptide[I]40,ELP[I]40)在大肠杆菌周质空间的表达。构建表达载体pIG6LH/ELP[I]40及pIG6LH/ELP[I]40+Trx,分别将构建的表达载体转
【机 构】
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大连理工大学生命科学与技术学院,大连大学医学院,辽东学院农学院
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31370937）, 大连大学博士启动基金项目（L2010015）,大连大学大学生创新创业训练计划项目（2013110）
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旨在研究类弹性蛋白[I]40(elastin-like polypeptide[I]40,ELP[I]40)在大肠杆菌周质空间的表达。构建表达载体pIG6LH/ELP[I]40及pIG6LH/ELP[I]40+Trx,分别将构建的表达载体转化入表达宿主菌E.coli BLR（DE3）,IPTG诱导表达,采用可逆相变循环（Inverse transition cycling,ITC）技术纯化蛋白。测定ELP[I]40及ELP[I]40+Trx蛋白相变温度（Tt）,检测ELP[I]40、ELP[I]40+Trx蛋白浓度及NaCl对相变温度的影响。结果显示,经3轮ITC纯化得到了ELP[I]40、ELP[I]40+Trx蛋白。分别测定ELP[I]40和ELP[I]40+Trx在10、25、50、75和100μmol/L浓度下的Tt,其Tt依次为31.5℃、29℃、27℃、26℃、25℃和31.8℃、29.5℃、27.5℃、26℃、25.5℃;测定了不同浓度的NaCl对Tt影响,在ELP[I]40和ELP[I]40+Trx终浓度为25μmol/L,NaCl浓度为0.25、0.5、0.75、1.00和1.25 mol/L时,分别使ELP[I]40的Tt由29℃降至24.5℃、22℃、19℃、15℃和11.5℃,使ELP[I]40+Trx的Tt由29.5℃降至25℃、23℃、20.2℃、15.5℃和11.8℃。在大肠杆菌周质空间表达的ELP[I]40与胞内表达的具有相同的理化性质,ELP可作为在大肠杆菌周质空间表达的蛋白质分离纯化标签。
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