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[摘要]目的：探讨绞股蓝皂苷对衰老小鼠皮肤的抗氧化保护作用。方法：60只小鼠随机分成3组，青年组（A）、老年对照组（B）和老年给药组（C）；A、B组灌胃生理盐水20ml/kg，C组灌胃绞股蓝皂苷提取液8g/kg，每天1次。30天后取皮肤组织，检测丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果：与A组比较，B组、C组皮肤组织中MDA含量增加，SOD、CAT、GSH-Px活性降低（P<0.05）；与B组比较，C组皮肤组织中MDA含量减少，SOD、CAT、GSH-Px活性增加（P<0.05）。结论：灌胃绞股蓝皂苷可减轻衰老小鼠皮肤的氧化损伤，具有延缓小鼠皮肤衰老的作用。
[关键词]绞股蓝皂苷；抗氧化损伤；皮肤衰老
[中图分类号]R339.3+8 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2015）03-0034-02
Abstract： Objective To study the antioxidative protection of Gypenosides in aged mices skin. Methods 60 mices were selected and randomly divided into 3 groups：young control group （group A），aged control group （group B） and aged dose group （group C）. In group A and group B，normal saline （20ml/kg） was given intragastricly. Gypenosides extracts at doses of 8g/kg was administered intragastricly in group C，once a day. Skin tissue from treated mices were prepared for analysis 30 days after treatments. Relative level changes of MDA，SOD，CAT and GSH-Px were measured. Results Increases in MDA and decreases in SOD，CAT and GSH-Px were observed in both group B and group C as compared with group A（P<0.05）. Compared with mices in group B， mices in group C showed significant decreases in MDA and increases in SOD，CAT and GSH-Px（P<0.05）. Conclusion Intragastric administration of Gypenosides extracts to mices could alleviate the oxidative injury to aged skin，and therefore could delay the skin aging in mices.
Key words：Gypenosides； antioxidative injury； aged skin
随着年华老去，各系统、器官、组织甚至细胞都会发生改变，皮肤也不例外。其功能的减弱或丧失，不仅影响美观，而且增加了多种皮肤疾病的发生率[1]。国内外学者试图运用多种理论解释衰老的进程，其中包括氧化应激学说，即氧化产物的生成与清除之间的失衡，导致了衰老的发生、发展[2]。绞股蓝是葫芦科草质藤本植物，是五加科之外唯一含有与人参皂苷相似结构皂苷的植物，其皂苷成分具有保护心脑血管、抗脑缺氧、抗肿瘤及抗衰老等药理作用，并在治疗高血脂症、血管性痴呆、消化道溃疡以及中风等方面取得了一定的疗效，因此引起国内外众多学者的重视[3]。本实验拟通过研究绞股蓝皂苷（Gyp）对自然衰老小鼠皮肤中氧化产物含量及抗氧化酶活性的影响，探索其抗衰老的药理作用及机制，为绞股蓝的进一步临床应用及市场开发提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组
清洁级昆明种小鼠18月龄40只，6月龄20只，雌雄各半，体重35～59g，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分3组：青年组（A）、老年对照组（B）和老年给药组（C）。动物按性别及组别分笼饲养，常规饲食饮水。
1.2 药品制备及给药
绞股蓝皂苷粉末（成都曼思特生物科技有限公司）用干燥箱烘干24h，以水作为溶剂进行浸提，浸提条件为90℃，30min。冷却至室温，过滤、澄清，得提取液0.4g生药/ml，放置4℃冰箱待用。A、B组灌胃生理盐水20ml/kg，C组灌胃绞股蓝皂苷提取液8g/kg。以上操作每天1次，共进行30d。
1.3 取材及指标测定
将各组小鼠于第31天用剃毛器脱去背部皮肤毛发，面积为2cm×3cm。处死小鼠，取背部脱毛处全层皮肤，面积为1cm×1cm，制成组织匀浆，按试剂盒（南京建成生物医学工程研究所）说明书的方法分别检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。
1.4 统计学处理
所有数据均通过SPSS12.0软件进行处理，各组实验参数以x±s表示。组间差异按方差分析进行显著性检验，并用最小显著差法（LSD法）作两两比较。P<0.05有统计学意义。
2 结果
与A组比较，B组和C组的MDA含量均增加，SOD、CAT和GSH-Px活性均不同程度降低（P<0.05）。与B组比较，C组的MDA含量降低，SOD、CAT和GSH-Px活性增加（P<0.05）。提示自然衰老小鼠皮肤中，氧化产物MDA含量增加，抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性降低；灌胃绞股蓝皂苷可减少自然衰老小鼠皮肤组织中MDA生成，提高SOD、CAT、GSH-Px活性。见表1。 3 讨论
衰老的自由基学说认为，衰老过程源于氧化应激反应，即过剩的自由基对细胞及组织的损害[4-5]。氧自由基是机体正常代谢的中间产物，因含有未配对的电子，而具有不稳定性，可引发链式自由基反应。低浓度的氧自由基是机体执行正常生理功能所必需的，但高浓度时则可攻击细胞膜、蛋白质、核酸而造成组织结构的氧化损伤。氧化应激也可以破坏DNA的结构，引发 DNA 损伤应答，或者直接调控衰老相关的信号通路，促进细胞衰老的发生[6-7]。MDA就是氧自由基与细胞膜中不饱和脂肪酸发生过氧化反应，形成的氧化终产物[8]。MDA是很强的交联剂，可与蛋白质、核酸等结成难溶性物质，使细胞膜硬化导致其通透性降低，影响细胞的物质交换，继而使之破裂、凋亡。与此同时，机体内存在对抗氧自由基的抗氧化系统，酶和非酶系统。主要的抗氧化酶包括，SOD、CAT和GSH-Px。SOD是超氧阴离子的清除剂，CAT和GSH-Px可以清除H2O2和脂质过氧化物[9-11]。随着年龄增加，人体内MDA大量堆积，如SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶活性降低[12]，因此监测氧化产物含量和抗氧化酶活性的变化可在一定程度上了解氧化应激在器官、组织自然衰老中的作用。
本实验中，老年对照组没有给予绞股蓝皂苷处理，其各项实验数据与青年组比较显示，较正常皮肤自然衰老的小鼠皮肤组织中氧化产物增加，抗氧化酶活性降低，支持氧化应激致皮肤衰老的假设。与老年对照组相较，老年给药组的检测结果显示，灌胃绞股蓝皂苷一段时间后，衰老的皮肤组织中抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性增高，MDA含量降低。提示绞股蓝皂苷可以通过提高抗氧化酶的活性，增强氧自由基的清除，减轻脂质过氧化损伤的程度，使MDA含量降低，从而削弱氧化应激反应对组织的损伤，一定程度延缓皮肤衰老。但最佳的给药途径、时间和浓度有待进一步的深入研究。绞股蓝皂苷是否还可以通过其他机制减轻或改变自然衰老皮肤的损伤可成为研究人员探索的新方向。
[参考文献]
[1]王诗晗.黄芪提取液对光老化无毛小鼠皮肤组织HYP MDA含量及SOD活力的影响[J].中医药学刊，2006，24（4）：718-719.
[2] Poljsak B， Dahmane RG， Godic A. Intrinsic skin aging： the role of oxidative stress[J].Acta Dermatovenerol Alp Pannonica Adriat，2012，21（2）：33-36.
[3]倪红，李薇，熊哲，等.绞股蓝皂甙药理与临床研究进展[J].河北农业科学，2011，15（9）：44-46.
[4]牛豫洁，蒙定水，戴国玮.玉屏补肾汤对亚急性衰老小鼠模型氧化应激的影响[J].陕西中医，2010，31（4）：494-494.
[5]Nichols JA， Katiyar SK. Skin photoprotection by natural polyphenols：anti-inflammatory， antioxidant and DNA repair mechanisms[J]. Arch Dermatol Res，2010，302（2）：71-83.
[6]Menck CF，Munford V.DNA repair diseases：What do they tell us about cancer and aging[J] .Genet Mol Biol，2014，37（1）：220-233.
[7]Staal FJ，Luis TC.Wnt signaling in hematopoiesis：crucial factors for self-renewal， proliferation，and cell fate decisions[J]. J Cell Biochem，2010，109（5）：844-849.
[8]房林，赵振民. 皮肤衰老机制的研究进展[J].人民军医，2010，53（2）：149-152.
[9]傅永锦，潘竞锵，张小牧，等. 水飞蓟宾对D-半乳糖诱导衰老大鼠抑制糖氧化应激反应及改善学习记忆作用[J].中国临床药理学与治疗学，2012，17（1）：10-14.
[10]Kalyanaraman B.Teaching the basics of redox biology to medical and graduate students： Oxidants，antioxidants and disease mechanisms[J].Redox Biol，2013，1（1）：244-257.
[11]李华，叶目亭杰，李伯勤，等. 虫草多糖对皮肤成纤维细胞抗氧化能力的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010，4（2）：160-162.
[12]袁淑苹，马生吉，周小平.补益营卫方对D-半乳糖衰老模型抗氧化酶及免疫因子的影响[J].时珍国医国药，2013，24（2）：259-260.
[收稿日期]2014-11-28 [修回日期]2015-01-27
编辑/张惠娟
[关键词]绞股蓝皂苷；抗氧化损伤；皮肤衰老
[中图分类号]R339.3+8 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2015）03-0034-02
Abstract： Objective To study the antioxidative protection of Gypenosides in aged mices skin. Methods 60 mices were selected and randomly divided into 3 groups：young control group （group A），aged control group （group B） and aged dose group （group C）. In group A and group B，normal saline （20ml/kg） was given intragastricly. Gypenosides extracts at doses of 8g/kg was administered intragastricly in group C，once a day. Skin tissue from treated mices were prepared for analysis 30 days after treatments. Relative level changes of MDA，SOD，CAT and GSH-Px were measured. Results Increases in MDA and decreases in SOD，CAT and GSH-Px were observed in both group B and group C as compared with group A（P<0.05）. Compared with mices in group B， mices in group C showed significant decreases in MDA and increases in SOD，CAT and GSH-Px（P<0.05）. Conclusion Intragastric administration of Gypenosides extracts to mices could alleviate the oxidative injury to aged skin，and therefore could delay the skin aging in mices.
Key words：Gypenosides； antioxidative injury； aged skin
随着年华老去，各系统、器官、组织甚至细胞都会发生改变，皮肤也不例外。其功能的减弱或丧失，不仅影响美观，而且增加了多种皮肤疾病的发生率[1]。国内外学者试图运用多种理论解释衰老的进程，其中包括氧化应激学说，即氧化产物的生成与清除之间的失衡，导致了衰老的发生、发展[2]。绞股蓝是葫芦科草质藤本植物，是五加科之外唯一含有与人参皂苷相似结构皂苷的植物，其皂苷成分具有保护心脑血管、抗脑缺氧、抗肿瘤及抗衰老等药理作用，并在治疗高血脂症、血管性痴呆、消化道溃疡以及中风等方面取得了一定的疗效，因此引起国内外众多学者的重视[3]。本实验拟通过研究绞股蓝皂苷（Gyp）对自然衰老小鼠皮肤中氧化产物含量及抗氧化酶活性的影响，探索其抗衰老的药理作用及机制，为绞股蓝的进一步临床应用及市场开发提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组
清洁级昆明种小鼠18月龄40只，6月龄20只，雌雄各半，体重35～59g，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分3组：青年组（A）、老年对照组（B）和老年给药组（C）。动物按性别及组别分笼饲养，常规饲食饮水。
1.2 药品制备及给药
绞股蓝皂苷粉末（成都曼思特生物科技有限公司）用干燥箱烘干24h，以水作为溶剂进行浸提，浸提条件为90℃，30min。冷却至室温，过滤、澄清，得提取液0.4g生药/ml，放置4℃冰箱待用。A、B组灌胃生理盐水20ml/kg，C组灌胃绞股蓝皂苷提取液8g/kg。以上操作每天1次，共进行30d。
1.3 取材及指标测定
将各组小鼠于第31天用剃毛器脱去背部皮肤毛发，面积为2cm×3cm。处死小鼠，取背部脱毛处全层皮肤，面积为1cm×1cm，制成组织匀浆，按试剂盒（南京建成生物医学工程研究所）说明书的方法分别检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。
1.4 统计学处理
所有数据均通过SPSS12.0软件进行处理，各组实验参数以x±s表示。组间差异按方差分析进行显著性检验，并用最小显著差法（LSD法）作两两比较。P<0.05有统计学意义。
2 结果
与A组比较，B组和C组的MDA含量均增加，SOD、CAT和GSH-Px活性均不同程度降低（P<0.05）。与B组比较，C组的MDA含量降低，SOD、CAT和GSH-Px活性增加（P<0.05）。提示自然衰老小鼠皮肤中，氧化产物MDA含量增加，抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性降低；灌胃绞股蓝皂苷可减少自然衰老小鼠皮肤组织中MDA生成，提高SOD、CAT、GSH-Px活性。见表1。 3 讨论
衰老的自由基学说认为，衰老过程源于氧化应激反应，即过剩的自由基对细胞及组织的损害[4-5]。氧自由基是机体正常代谢的中间产物，因含有未配对的电子，而具有不稳定性，可引发链式自由基反应。低浓度的氧自由基是机体执行正常生理功能所必需的，但高浓度时则可攻击细胞膜、蛋白质、核酸而造成组织结构的氧化损伤。氧化应激也可以破坏DNA的结构，引发 DNA 损伤应答，或者直接调控衰老相关的信号通路，促进细胞衰老的发生[6-7]。MDA就是氧自由基与细胞膜中不饱和脂肪酸发生过氧化反应，形成的氧化终产物[8]。MDA是很强的交联剂，可与蛋白质、核酸等结成难溶性物质，使细胞膜硬化导致其通透性降低，影响细胞的物质交换，继而使之破裂、凋亡。与此同时，机体内存在对抗氧自由基的抗氧化系统，酶和非酶系统。主要的抗氧化酶包括，SOD、CAT和GSH-Px。SOD是超氧阴离子的清除剂，CAT和GSH-Px可以清除H2O2和脂质过氧化物[9-11]。随着年龄增加，人体内MDA大量堆积，如SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶活性降低[12]，因此监测氧化产物含量和抗氧化酶活性的变化可在一定程度上了解氧化应激在器官、组织自然衰老中的作用。
本实验中，老年对照组没有给予绞股蓝皂苷处理，其各项实验数据与青年组比较显示，较正常皮肤自然衰老的小鼠皮肤组织中氧化产物增加，抗氧化酶活性降低，支持氧化应激致皮肤衰老的假设。与老年对照组相较，老年给药组的检测结果显示，灌胃绞股蓝皂苷一段时间后，衰老的皮肤组织中抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性增高，MDA含量降低。提示绞股蓝皂苷可以通过提高抗氧化酶的活性，增强氧自由基的清除，减轻脂质过氧化损伤的程度，使MDA含量降低，从而削弱氧化应激反应对组织的损伤，一定程度延缓皮肤衰老。但最佳的给药途径、时间和浓度有待进一步的深入研究。绞股蓝皂苷是否还可以通过其他机制减轻或改变自然衰老皮肤的损伤可成为研究人员探索的新方向。
[参考文献]
[1]王诗晗.黄芪提取液对光老化无毛小鼠皮肤组织HYP MDA含量及SOD活力的影响[J].中医药学刊，2006，24（4）：718-719.
[2] Poljsak B， Dahmane RG， Godic A. Intrinsic skin aging： the role of oxidative stress[J].Acta Dermatovenerol Alp Pannonica Adriat，2012，21（2）：33-36.
[3]倪红，李薇，熊哲，等.绞股蓝皂甙药理与临床研究进展[J].河北农业科学，2011，15（9）：44-46.
[4]牛豫洁，蒙定水，戴国玮.玉屏补肾汤对亚急性衰老小鼠模型氧化应激的影响[J].陕西中医，2010，31（4）：494-494.
[5]Nichols JA， Katiyar SK. Skin photoprotection by natural polyphenols：anti-inflammatory， antioxidant and DNA repair mechanisms[J]. Arch Dermatol Res，2010，302（2）：71-83.
[6]Menck CF，Munford V.DNA repair diseases：What do they tell us about cancer and aging[J] .Genet Mol Biol，2014，37（1）：220-233.
[7]Staal FJ，Luis TC.Wnt signaling in hematopoiesis：crucial factors for self-renewal， proliferation，and cell fate decisions[J]. J Cell Biochem，2010，109（5）：844-849.
[8]房林，赵振民. 皮肤衰老机制的研究进展[J].人民军医，2010，53（2）：149-152.
[9]傅永锦，潘竞锵，张小牧，等. 水飞蓟宾对D-半乳糖诱导衰老大鼠抑制糖氧化应激反应及改善学习记忆作用[J].中国临床药理学与治疗学，2012，17（1）：10-14.
[10]Kalyanaraman B.Teaching the basics of redox biology to medical and graduate students： Oxidants，antioxidants and disease mechanisms[J].Redox Biol，2013，1（1）：244-257.
[11]李华，叶目亭杰，李伯勤，等. 虫草多糖对皮肤成纤维细胞抗氧化能力的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010，4（2）：160-162.
[12]袁淑苹，马生吉，周小平.补益营卫方对D-半乳糖衰老模型抗氧化酶及免疫因子的影响[J].时珍国医国药，2013，24（2）：259-260.
[收稿日期]2014-11-28 [修回日期]2015-01-27
编辑/张惠娟