巨噬细胞在脉络膜新生血管(CNV)中的作用尚存在争议，与其在不同微环境中的功能异质性有关，Notch信号通路参与眼内新生血管生长的调控，但其对CNV中巨噬细胞功能的调控作用尚未证实。
目的探讨巨噬细胞在CNV生成中极化表型的变化与Notch信号通路对巨噬细胞极化表型的调控。
方法在体实验选择58只成年雄性C57BL小鼠，以随机数字表法按照造模后取材时间的不同随机分为光凝后3 d组和7 d组。每组选23只小鼠用视网膜光凝法诱导小鼠CNV模型，分别于光凝后3 d和7 d制备脉络膜铺片，采用免疫荧光染色法观察CNV面积和巨噬细胞阳性染色面积，血管内皮生长因子(VEGF)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌情况；光凝后3 d和7 d对眼杯冰冻切片行免疫荧光染色，观察CNV中巨噬细胞的极化表型及其分泌VEGF、TNF-α的情况，评估巨噬细胞上Notch信号胞内段(NICD)相应分子标志物的表达情况。每组设定6只小鼠的左眼为正常对照眼，其右眼以激光光凝法建立CNV模型，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测眼杯组织中VEGF、TNF-α和巨噬细胞极化相关因子的表达情况。体外分离和培养C57BL小鼠的骨髓单核前体细胞，用粒细胞–巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导其分化为巨噬细胞，加入Notch信号通路抑制剂γ-分泌酶抑制剂(GSI)和极化诱导因子，24 h后收集细胞及培养液上清，通过qRT-PCR及ELISA法检测M1型、M2型巨噬细胞分子表面标志物的表达水平。
结果与光凝后第3天比较，光凝后第7天CNV面积明显增大，但巨噬细胞浸润面积缩小，差异均有统计学意义(t＝8.138、5.272，均P＝0.000)。光凝后第3天，巨噬细胞在CNV周边和中央均有分布，第7天时局限于CNV中央部。光凝后第3天，色素上皮–脉络膜–巩膜复合体中精氨酸合酶1(Arg1)、甘露糖受体(MR)及白细胞介素-6(IL-6)mRNA的相对表达量明显高于第7天，而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的相对表达量无明显改变。免疫荧光结果显示，光凝后第3天F4/80＋Arg1＋细胞(M2型巨噬细胞)数量明显多于F4/80＋iNOS＋细胞(M1型巨噬细胞)，光凝后第7天F4/80＋Arg1＋细胞数量明显减少，差异均有统计学意义(t＝7.348，P＝0.000；t＝5.562，P<0.001)，但仍多于F4/80＋iNOS＋细胞，二者间差异有统计学意义(t＝4.568，P<0.01)。在光凝后3 d时巨噬细胞分泌的VEGF和TNF-α明显多于光凝后7 d，差异均有统计学意义(t＝5.143、4.519，均P<0.01)。巨噬细胞中Notch信号下游分子在光凝后3 d时未见表达，7 d时表达量明显增加，差异均有统计学意义(均P<0.05)。体外实验表明，阻断Notch信号后，M1型巨噬细胞分子标志物表达量明显下降，而M2型巨噬细胞分子标志物的表达量明显增加，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论巨噬细胞的极化表型在CNV模型的不同阶段发生变化，而巨噬细胞中Notch信号的激活状态调控巨噬细胞的极化表型改变和功能。