【摘 要】
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牛奶中血清淀粉样蛋白A(MAA)是表征奶牛乳腺炎的重要生物标志物,本研究构建了携带MAA基因的重组原核表达质粒pET28a-SUMO-MAA,采用大肠杆菌BL21(DE3)作为表达菌株,IPTG诱导表
【机 构】
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南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室,江苏南京210095;南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室,江苏南京210095;中国药科大学药学院,江苏南京211198
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牛奶中血清淀粉样蛋白A(MAA)是表征奶牛乳腺炎的重要生物标志物,本研究构建了携带MAA基因的重组原核表达质粒pET28a-SUMO-MAA,采用大肠杆菌BL21(DE3)作为表达菌株,IPTG诱导表达,获得可溶性重组蛋白SUMO-MAA,用特异性SUMO酶切除重组蛋白上的SUMO标签后通过亲和层析纯化获得MAA.用纯化后的MAA免疫BALB/c小鼠,制备抗MAA的单克隆抗体并测定其效价和特异性.结果 显示,本研究成功表达可溶性MAA蛋白,大小约为17 kDa,筛选出2株单抗均可与MAA蛋白反应,效价分别为1∶25600,1∶51200.试验为后续开发牛奶中血清淀粉样蛋白的检测方法以及奶牛乳腺炎的诊断研究奠定重要基础.
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