【摘 要】
：
旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制.本研究选取健康的3～4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA分析颗粒细胞的雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌,采用qRT-RCR、Western blot检测细胞凋亡、增殖、周期及类固醇激素合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平.结果 显示,miR-495-3p显著促进卵巢颗粒细胞凋亡(P＜0.01)
【机 构】
：
西南大学动物科学技术学院,重庆400715
论文部分内容阅读
旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制.本研究选取健康的3～4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA分析颗粒细胞的雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌,采用qRT-RCR、Western blot检测细胞凋亡、增殖、周期及类固醇激素合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平.结果 显示,miR-495-3p显著促进卵巢颗粒细胞凋亡(P＜0.01),并且促进BAX表达(P＜0.05),抑制BCL2表达(P＜0.01);过表达miR-495-3p呈时间依赖性抑制细胞增殖活力,显著降低PCNA的表达(P＜0.05);过表达miR-495-3p显著增加G2/M期细胞百分比(P＜0.05),并显著降低细胞周期相关基因CDK4(P＜0.001)和CCND1(P＜0.05)的mRNA水平,抑制miR-495-3p极显著降低CCNE1的mRNA水平(P＜0.01);miR-495-3p促进颗粒细胞E2和P4分泌;过表达miR-495-3p显著提高3β-HSD(P＜0.001)、CYP11A1(P＜0.01)、CYP19A1(P＜0.05)的mRNA和蛋白表达水平,干扰miR-495-3p极显著抑制3β-HSD(P＜0.01)、促进CYP11A1的表达(P＜0.01).上述结果表明,miR-495-3p促进颗粒细胞凋亡,抑制增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,刺激类固醇激素分泌,从而影响山羊卵泡的发育.
其他文献
本研究通过分析不同生理阶段边鸡卵巢转录表达谱,旨在找出与卵泡发育相关的基因并进行验证,以揭示边鸡就巢性强的遗传机制.构建代表不同生理期即70日龄(70 d,卵巢发育期)、165日龄(165 d,开产期)、220日龄(220 d,产蛋高峰期)和330日龄(330 d,就巢期)的边鸡卵巢基因表达谱,用转录组表达定量(RSEM)法对不同生理阶段边鸡卵巢基因表达进行相关性分析,通过基因差异表达、GO和KEGG分析筛选出与卵泡发育相关的候选基因,并应用实时定量PCR法对其表达进行验证.通过转录表达谱分析,共鉴定出1
为了寻找快大型肉鸭和优质小体型肉鸭的主要挥发性风味物质,构建不同品种肉鸭胸肌气味轮廓,探究品种对肉风味的影响.本试验以9周龄北京鸭、连城白鸭、野鸭胸肌为材料,采用固相微萃取-气相色谱-质谱(SPME-GC-MS)联用技术对其进行检测,计算相对气味活度值(ROAV)寻找各品种鸭胸肌中主要挥发性风味物质.运用正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)寻找3个品种肉鸭胸肌差异挥发性风味物质.同时结合电子鼻进行检测.通过SPME-GC-MS技术共检测出104种物质,这些化合物主要为醛类、醇类、酮类和呋喃类物质.北
旨在对广灵县优种驴场保种群体进行调查的基础上构建分子系谱,并对其种群的遗传结构进行分析.本研究采集保种群成年、体况良好的广灵驴(体重350～400 kg)颈静脉血10 mL(n=107),其中公驴13份,母驴94份,抗凝处理后提取全血DNA.采用12个微卫星标记进行荧光PCR扩增后,用ABI3730测序仪进行分型.分型结果采用Cervus 2.0和Pedigraph 2.4软件构建分子系谱,同时采用STRUCTURE2.3和Fstat软件计算群体遗传参数,采用R语言的hclust函数绘制7头公驴及其后代的
本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础.采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒,经PCR和测序鉴定后将阳性重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中.用IPTG诱导表达并优化表达条件,使用His标签镍柱纯化重组EPF蛋白并免疫小鼠制备抗体.结
旨在从奶牛乳腺组织中分离原代乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)并传代培养后探究其生物学特性.本研究从屠宰场采集健康泌乳奶牛乳腺并采用改进的酶消化法从乳腺中分离得到原代奶牛乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光以及染色体核型分析的方法对其进行鉴定.同时,研究第3、第6和第9代乳腺上皮细胞的生长曲线、群体倍增时间和冻存复苏活力,检测不同代次细胞分泌乳蛋白、乳脂、乳糖的功能及泌乳相关基因的表达.结果 表明,所分离的奶牛乳腺上皮细胞纯度较好,细胞生长呈现S型