论文部分内容阅读
背景:壳聚糖季铵盐衍生物可以提高载体的转染效率,同时解决了壳聚糖溶解性差的问题,扩展了其pH值适用范围。目的:合成一种新型壳聚糖季铵盐载体,研究其与质粒结合的条件及转染效率,并与壳聚糖进行对比。设计、时间及单位:分子生物学,对比观察实验,于2008-08/10在浙江大学医学院附属第二医院完成。材料:壳聚糖季铵盐——N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为北京理工大学高分子材料实验室合成。质粒pEGFP-C1为浙江大学医学院郑一春惠赠。Hela细胞为浙江大学医学院程静提供。方法:将N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖配制成质量浓度为0.2g/L、pH值为5.5(或6.9、7.6)、乙酸钠终浓度为50mmol/L的乙酸溶液,迅速与质粒pEGFP-C1混合,并在旋转混合器上涡流15～30s,室温静置30min以上,促进复合物的形成。主要观察指标:通过凝胶阻滞实验研究了pH值及时间对壳聚糖季铵盐与质粒结合能力的影响。通过荧光倒置显微镜观察壳聚糖季铵盐作为载体转染Hela细胞的效率,并与壳聚糖进行对比。结果:N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖能够在酸性、中性及碱性条件下溶解,并能够与质粒DNA很好的结合形成复合物,拓展了其使用范围。在酸性条件下,N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖与质粒的结合作用强于壳聚糖。壳聚糖及N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖在酸性条件下,30min即可与质粒形成稳定的复合物,并在12h内保持良好的稳定性。Hela细胞的体外转染结果表明,N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的转染效率大于壳聚糖。结论:N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖所适用的pH值范围较壳聚糖更加广泛,其稳定性与壳聚糖无明显差别,并且对Hela细胞的体外转染效率略高于壳聚糖,值得对其进行更深入的研究。