目的:建立灵芝超微粉、普通粉及其提取物三萜类成分高效液相色谱(HPLC)指纹图谱研究方法,并比较三者之间指纹图谱的差异,揭示超微粉碎技术对灵芝三萜类成分溶出的影响。方法:采用HPLC法,色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱;检测波长:252nm;流速:1.0m L/min;柱温:35℃。结果:通过对10批灵芝药材超微粉、普通粉及其提取物指纹图谱的分析,共确立了13个共有峰,相似度均大于0.88,t检验结果显示:10批灵芝超微粉与普通粉主要共有峰单位质量相对峰面积之间有显著性差异(P<0.01);10批灵芝超微粉、普通粉分别与10批灵芝提取物主要共有峰相对峰面积平均值之间有显著性差异(P<0.01)。结论:该方法准确,重复性好,灵芝药材超微粉碎后,三萜类成分种类数目并未改变但单位质量相对峰面积积分值均明显提高。超微粉碎技术能有效促进灵芝三萜类成分的溶出。