竹节花黄斑驳病毒启动子的缺失分析及功能

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竹节花黄斑驳病毒(CoYMV)是侵染单子叶植物竹节花的一种双链环状DNA病毒,它的启动子可介导外源基因在烟草韧皮部特异表达。为了研究其组织特异性表达的最佳启动子区域,对CoYMV启动子进行了5′端五种不同长度的缺失分析,用不同长度的启动子片段与GUS基因及NOS3′端转录中止序列构建了全长启动子及5个缺失启动子序列的六个嵌合GUS基因植物表达载体。利用农杆菌将上述嵌合基因转化烟草外植体后,每种表达载体都获得了一批转基因烟草植株。转化再生烟草植株的PCR分析、GUS酶活测定及GUS组织染色的结果表明六种类型的嵌合基因已整合到烟草染色体中,并有五种表达出GUS活性。缺失到870bp的启动子比全长启动子(1040bp)的活性约高78%,870bp比585bp启动子介导的GUS活性略高但差别不明显,缺失到447和232时GUS活性有明显下降,但仍具有韧皮部特异表达的特性。当缺失到TATAbox附近的44bp时启动子丧失组织特异性,GUS活性也降低到测不出来的水平。以上结果表明CoYMV启动子从转录起始位点上游870bp~230bp及232bp下游区分别与启动子的活性和韧皮部组织特异性密切相关,87?
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