【摘 要】
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目的:利用双向启动子型RNA干涉载体pRHU构建随机RNA干涉文库.方法:分别构建基于pRHU载体的绿色荧光蛋白EGFP和p53的干涉质粒,验证双向启动子型RNA干涉载体的可用性.设计合成
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,中国人民解放军第89医院,军事医学科学院基础医学研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金;国家重点基础研究发展计划(973计划)
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目的:利用双向启动子型RNA干涉载体pRHU构建随机RNA干涉文库.方法:分别构建基于pRHU载体的绿色荧光蛋白EGFP和p53的干涉质粒,验证双向启动子型RNA干涉载体的可用性.设计合成满足pRHU载体特点的干涉文库随机模板,经PCR扩增克隆入pRHU载体,转化感受态细胞获取随机干涉文库.随机挑选20个菌落测序,评价随机文库质量.结果:双向启动子型RNA干涉载体pRHU能在哺乳动物细胞中对外源基因EGFP和内源基因p53进行有效的干涉,表明该载体是一个有效的干涉载体,可以用于构建随机RNA干涉文库.本研究采用的构建策略可在较短时间内,用50 μg pRHU载体获得4×106个克隆.随机挑选20个克隆测序结果表明均插入了GN17-19序列,并且不存在序列重复性.结论:采用本研究的构建策略可以简便快速地利用双向启动子型干涉载体成功构建随机RNA干涉文库,为进一步筛选功能基因奠定了基础.
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