目的 构建猪带绦虫pGEX-TSO45W-4B-TSOL18重组质粒,纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清.方法 用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因.将融合基因定向克隆到pGEX-1 λT表达载体上,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,再用重组质粒转化大肠埃希菌(E.col) ArcticExpress (DE3).用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达情况,亲和层析纯化获得重组融合蛋白.用纯化的重组蛋白按0.5 mg/只与弗氏完全佐剂(CFA)混合,于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射;2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂(IFA)混合加强免疫,此后每隔10 d按第2次免疫法重复加强免疫,第4次免疫后6d,采集兔心脏血并分离血清,立即纯化及制备抗血清.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗血清的效价,采用蛋白印迹(Western blot)法鉴定抗血清的特异性.结果 全基因合成的TSO45W-4B-TSOL18融合基因片段长度为789 bp.酶切证实pGEX-TSO45W-4B-TSOL18重组质粒成功构建,测序结果获得的基因片段大小为789 bp,与预期大小相符.SDS-PAGE分析和亲和层析后显示,重组质粒在转化E.col ArcticExpress(DE3)后,获得了相对分子质量约为55×103的重组融合蛋白,纯度为85％.ELISA测定兔抗血清的效价为1∶512 000,Western blot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应,在相对分子质量约为55×103处出现1条与预期大小一致的特异性条带.结论 成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18及制备了高纯度的TSO45W-4B-TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。
猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)中的表达、纯化和兔抗血清的制备
【摘 要】
：
目的 构建猪带绦虫pGEX-TSO45W-4B-TSOL18重组质粒,纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清.方法 用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser)3连接TSO45W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因.将融合基因定向克隆到pGEX-1 λT表达载体上,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18,再用重组质粒转化大肠埃希菌(E.
【机 构】
：
563003遵义医学院寄生虫学教研室,563003遵义医学院附属第一医院中医科,563003遵义医学院寄生虫学教研室,563003遵义医学院寄生虫学教研室,563003遵义医学院寄生虫学教研室
【出 处】
：
中华地方病学杂志
【发表日期】
：
2013年32期
论文部分内容阅读
其他文献
疟原虫是疟疾的病原体,间日疟原虫[Plasmodium(P.)vivax,Pv]、三日疟原虫(P.malariae,Pm)、恶性疟原虫(P.falciparum,Pf)和卵形疟原虫(P.ovale,Po)是寄生人体的4种疟原虫,分别引起间日疟、三日疟、恶性疟和卵形疟.疟疾是一种由蚊媒传播的严重危害人类健康的寄生虫病,是国家卫生部门规划防治的重点寄生虫病之一.疟疾呈世界性分布,全球有90多个国家为疟
目的 对云南省鼠疫菌株进行基因分型,探究云南各型菌株之间的内在联系.方法 选取云南家鼠、野鼠及玉龙鼠疫菌共171株进行试验,采用鼠疫菌基因组23个差异片段(DFR)进行分型,并运用BioNumerics 5.0进行聚类分析.结果 23个差异片段将171株鼠疫菌分为7个基因组型:Genomovar5、Genomovar7、Genomovar9型及4个新发现的基因型.7株玉龙型菌株都为Genomova
地方性砷中毒是我国政府高度重视的地方病之一."十一五"期间,国家和各级政府投入大量资金用于地方性砷中毒的预防和控制,通过改水、改灶,健康教育等一系列措施有效地阻断了高砷暴露,取得了显著成就[1].由于地球化学和水文地质学的影响,病区依然存在持续低剂量砷污染,当地居民仍面临砷污染带来的健康威胁[1-4].关键词：生物学标志;砷中毒;地方病;健康预警;危险度评定
目的 动态观察低硒对大鼠在体心功能及线粒体超微结构的影响,探讨低硒致心肌损伤的机制.方法 断乳2周清洁级SD大鼠48只,按体质量随机分为低硒(LS)组和对照(NC)组,每组24只,雌雄各半.对照组给予常规饲料(硒含量0.10～ 0.30 mg/kg)喂养,低硒组给予人工合成低硒饲料(硒含量0.01 mg/kg)喂养.两组大鼠分别在喂养10、20、30、40周后,各选取6只,雌雄各半,2,3-二氨基
目的 了解饮水型地方性氟中毒的病情动态,评价防治措施的落实效果,为及时调整防治策略提供科学依据.方法 在河北省的10个饮水型氟中毒病区市各抽取1个县(市、区),每个县(市、区)调查10个改水工程运行情况及采集水样,了解改水工程水氟含量.在每个县(市、区)抽取3个村进行病情监测,监测包括改水工程运行情况、水氟含量、8～ 12岁学生氟斑牙检查和成人氟骨症X线检查.结果 共调查93个改水工程,工程正常运
目的 研究样品消化条件对尿碘测定结果的影响,为2012年新修订尿碘测定标准方法的应用提供支持.方法 根据新修订的尿碘测定标准方法,使用3份标准物质[GWB09108k、GWB09109f、GWB09110m,碘含量分别为(68.2±9.0)、(138.0±10.0)、(221.0±10.0)μg/L]、5份尿样(碘含量为100～300 μg/L),对消解液的浓度(0.8 ～ 1.3 mol/L过硫
目的 调查分析内蒙古乌兰察布市人间布鲁杆菌病(简称布病)流行病学特征.方法 选取2011年4-6月内蒙古乌兰察布市地方病防治中心登记检查的320名疑似布病患者作为调查对象.调查内容包括观察对象的一般情况,如性别、年龄、职业、主要临床症状等.同时采集观察对象血样,用琥红平板凝集试验(RBPT)进行血清筛查,对RBPT试验阳性者,用试管凝集试验(SAT)进行确诊.参照《布鲁氏菌病诊断标准》(WS 26
目的 观察甲状腺指征与甲状腺疾病之间的联系,以及通过门诊数据,增进对甲状腺疾病认识.方法 200例25～50岁妇女甲状腺影像学资料来自哈尔滨医科大学附属第一医院超声科.记录年龄、体质量、甲状腺体积、结节数量、结节面积、结节性质、甲状腺疾病等7项指征.以声像图改变为依据分组:无病组136例,甲状腺声像图改变基本正常;轻度组9例,声像图表现为甲状腺弥漫性肿大或合并1～2个囊性结节;中度组38例,声像图
目的 观察青海省兴海县大骨节病(KBD)病区儿童血清中丙二醛(MDA)及抗氧化酶的变化,探讨体内氧自由基损伤与KBD的关系.方法 在青海省兴海县KBD病区唐乃亥乡小学、下鹿圈村小学以及曲什安乡小学选择7～ 12岁的KBD患儿64名作为KBD组,46名健康儿童作为内对照组,在非病区陕西省长安区南樊小学选择59名健康儿童作为外对照组.分别采集其枕部发样和清晨空腹外周血,采用单纯随机抽样方法在每组中各抽
目的 评价2000-2012年青海省各级碘缺乏病实验室外质控考核结果,以促进检测水平不断提高,为政府部门制订西部地区碘缺乏病防治决策提供科学数据.方法 对2000-2012年全省各级碘缺乏病实验室参加国家碘缺乏病参照实验室的外质控考核结果进行分析.结果 2000-2012年青海省省级尿碘和盐碘实验室考核合格率均为100.0％;地市级尿碘、盐碘实验室考核合格率均呈现逐年上升趋势(尿碘合格率分别为50