目的 探讨氯化钴( CoCl2)诱导的化学低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移能力的影响.方法 采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSC,流式细胞仪检测其表面标志物( CD29、CD90、CD45)鉴定BMSC;分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪,检测不同CoCl2浓度(0、50、100、150、200、300、400、600 μmol/L)和不同时间(0、6、12、24、48、72 h)培养条件下BMSC的增殖和凋亡情况,确立CoCl2化学低氧预处理BMSC的实验模型；细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测低氧预处理对BMSC迁移能力的影响；Western印迹法和实时定量PCR检测低氧预处理后BMSC的低氧诱导因子(HIF) -1α和CXC趋化因子受体4(CXCR4)蛋白及mRNA的表达；运用siRNA技术沉默HIF-1α基因以及使用CXCR4抑制剂AMD3100,观察预处理后BMSC迁移能力变化.结果 培养的BMSC呈现CD29和CD90高表达,CD45低表达；CoCl2浓度200 μmol/L、培养时间24h为本研究BMSC化学低氧预处理的实验模型；通过细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验发现,低氧预处理组BMSC的细胞迁移能力强于常氧培养组[划痕试验:(0.396±0.018)mm比(0.200±0.011)mm,Transwell细胞迁移实验:21.0±4.5比8.5±1.7,均P＜0.05]；低氧预处理组HIF-1α及CXCR4的蛋白及mRNA表达明显高于常氧培养组(P＜0.05)；低氧预处理组BMSC HIF-1α基因沉默后或经AMD3100处理后细胞迁移能力与常氧培养相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CoCl2诱导的化学低氧预处理可促进BMSC的体外迁移能力,其机制可能与低氧预处理后HIF-1α表达上调进而介导CXCR4在BMSC表达增加有关。
低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响
【摘 要】
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目的 探讨氯化钴( CoCl2)诱导的化学低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移能力的影响.方法 采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSC,流式细胞仪检测其表面标志物( CD29、CD90、CD45)鉴定BMSC;分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪,检测不同CoCl2浓度(0、50、100、150、200、300、400、600 μmol/L)和不同时间(0、6、12、24、48
【机 构】
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200032上海,复旦大学附属中山医院肾内科,200032上海,复旦大学附属中山医院肾内科,200032上海,复旦大学附属中山医院肾内科,200032上海,复旦大学附属中山医院肾内科,200032上海
【出 处】
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中华医学杂志
【发表日期】
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2012年92期
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