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目的
模拟创伤性脑损伤(TBI)脑组织经亚低温治疗后的化学微环境,探讨该环境对体外脐带间充质干细胞(UCMSCs)的影响。
方法选取18只SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组大鼠仅开骨窗,不行冲击损伤;TBI组大鼠仅行冲击损伤;亚低温组大鼠经TBI后行亚低温治疗,各组6只。采用电子脑皮质挫伤撞击仪制作大鼠TBI模型。给予全身亚低温(33℃)治疗4 h后,获取大鼠模型损伤区域脑组织的匀浆液。模拟脑组织弹性模量制备聚丙烯酰胺水凝胶。分离培养人UCMSCs,将其置于上述水凝胶上进行培养,分别加入各组大鼠的脑组织匀浆液,24 h后检测各组细胞的凋亡水平,并更换为UCMSCs的正常培养基。动态观察细胞的生长情况和形态变化,于7 d后对其行免疫荧光检测其向神经元分化水平。
结果假手术组、TBI组、亚低温组的细胞凋亡率分别为10.42%、73.47%和28.57%,与假手术组比较,TBI组的凋亡细胞明显增多(P<0.01),而亚低温组可显著逆转TBI组诱导的凋亡细胞增多(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,假手术组、TBI组、亚低温组细胞的神经元总体分化率分别为16.48%、2.59%和11.83%,与TBI组比较,亚低温组UCMSCs的神经元分化率明显增高(P<0.05)。
结论TBI后的化学微环境可导致UCMSCs大量凋亡,且向神经元分化的能力大大降低;而亚低温治疗可减少TBI所致UCMSCs的凋亡,并使其分化能力得到一定恢复。