【摘 要】
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目的探讨原核表达HPV16L1蛋白的变性、纯化及复性条件,并对复性效果进行评价。方法将重组质粒pET28a-L1转化E.coliBL21(DE3),经放大培养诱导表达后,收集菌体,超声破碎后提取
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目的探讨原核表达HPV16L1蛋白的变性、纯化及复性条件,并对复性效果进行评价。方法将重组质粒pET28a-L1转化E.coliBL21(DE3),经放大培养诱导表达后,收集菌体,超声破碎后提取包涵体,并对其进行洗涤、变性,离子交换层析纯化,然后稀释复性。经电镜观察、红细胞凝集试验以及免疫原性分析,对复性效果进行评价。结果L1蛋白在8mol/L尿素中溶解不完全,SDS、硫脲和高pH值可提高其溶解度;纯化后的L1蛋白纯度可达90%;电镜可观察到VLP,并能凝集小鼠红细胞。免疫家兔后,可产生高滴度的抗体。结论复性的HPV16L1蛋白在体外可自我折叠形成具有正确空间构象的VLP,且具有较好的免疫原性,为进一步研制HPV16预防性疫苗及诊断试剂盒奠定了基础。
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