【摘 要】
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宠物浅表皮肤真菌病主要由犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌感染引起。本研究旨在建立一种快速检测这三种真菌病原的多重PCR方法。根据真菌ITS区域的序列差异设计了4条
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程重点实验室; 南京大学医学院附属鼓楼医院皮肤科; 江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院;
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2016YFD0501005);国家公益性行业(农业)科研专项(201303042);江苏省农业科技自主创新资金CX(15)1065
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宠物浅表皮肤真菌病主要由犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌感染引起。本研究旨在建立一种快速检测这三种真菌病原的多重PCR方法。根据真菌ITS区域的序列差异设计了4条引物,优化了多重PCR反应条件,同时对其特异性、灵敏性、重复性进行分析。结果显示,建立的多重PCR方法对犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌基因组DNA均可扩增出特异性预期片段,条带大小分别为286bp、596bp、188bp;最低检测限(灵敏性)分别为12.6pg/μL、8.8pg/μL和13.6pg/μL;被检测的6份人工模拟样品扩增结果准确。应用该多重PCR方法检测27份人临床皮屑样品和43份宠物犬、猫毛发样品,结果显示其阳性检出率分别为74.07%(20/27)和83.72%(36/43);采用常规真菌分离培养法从阳性样品中获得10株致病性真菌,分离率为17.86%(10/56);两种检测方法的种属鉴定结果表明多重PCR法优于常规方法。本试验建立的多重PCR检测方法简便、特异、灵敏,可同时对宠物浅表真菌病原作出快速诊断与鉴别。
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