【摘 要】
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为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ）cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室; 牡丹江师范学院生命科学与技术学院;
【基金项目】
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黑龙江省青年科学基金项目(QC2018033);黑龙江省自然科学基金重点项目(Z D2016006);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302016013;1610302017013;1610302018013)
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为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ）cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体pET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET-32a-IFNγ。转染PCAGG-IFNγ于DEF细胞后第24小时,接种鸭肠炎病毒（duck enteritis virus,DEV）。同时将pET-32a-IFNγ在大肠杆菌原核表达系统中进行蛋白表达,并用纯化产物处理DEF细胞,处理后第24小时接种DEV,分别采用Western-blot、TCID50测定方法和荧光定量PCR检测重组蛋白IFNγ对DEV复制的影响,并检测细胞中相关干扰素刺激因子（interferon-stimulated genes,ISGs）、抗黏液病毒基因（Myxovirus resistance,Mx）、泛素样2’-5’寡聚腺苷酸合成酶（2’-5’oligoadenylatesynthetases-like,OASL）、DEAD框蛋白50（DEAD-box protein 50,DDX50）的表达变化情况。结果发现,无论是真核表达的还是原核表达的重组IFNγ均能抑制DEV的复制,并引起ISGs表达的上调。本研究结果为进一步探索鸭IFNγ的抗病毒机制提供了基础数据。
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