【摘 要】
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人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用.利用改进的PCR体系,从人类基因组DNA中扩增出自hSCF基因编码起始位点(+1
【机 构】
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湖南医科大学分子生物学研究中心长沙
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人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用.利用改进的PCR体系,从人类基因组DNA中扩增出自hSCF基因编码起始位点(+181)至5＇旁侧-1190位点共1 372 bp的片段,将其克隆至pGEM-T载体中,经序列分析证明无误.为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域,用基因缺失技术从-162(BstX I)位点向上游分别延伸至-273(Pst Ⅰ)、-339(Sma Ⅰ)、-381(Sac Ⅰ)、-440(EcoR Ⅰ)、-570(Hinc Ⅱ)、-853(Bgl Ⅱ)及-1190(Xho Ⅰ)等位点,共获7个不同长度的hSCF基因5＇旁侧序列片段,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶(luc)报告基因栽体pGL2-Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染HeLa细胞,培养48 h后检测Luc活性.结果表明:hSCF基因5＇旁侧-1190～-853区域对luc表达有明显的增强作用,而-339～-273区域则显示有抑制作用.分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验,结果均出现一个或多个特异性滞留区带,说明这两个区域存在转录因子的结合位点.实验结果表明,hSCF基因5＇旁侧-1190～-853区域富含AT,是一典型基质结合区,而-339～-273区域为一新的沉默子,在hSCF基因表达中发挥调控作用.
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