CYP2A6基因多态性的一步PCR-RFLP分析法

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目的:建立CYP2A6基因多态性的一步PCR-RFLP分析法.方法:取外周静脉血100 μl,用Rose法提取基因组DNA,用特异性引物CYP2A6F03:5'-CTG ATC GAC TAG GCG TGG TA-3',CYP2A6R06:5'-CGT CCT GGG TGT TTT CCT TC-3'进行一步PCR扩增,用限制性内切酶DdeⅠ,XcmⅠ对PCR产物进行酶切,3%琼脂糖凝胶电泳.结果:扩增的PCR产物大小为214bp,部分血样标本未获得PCR扩增产物,判为CYP2A6缺失基因型(CYP2A6 del/CYP2A6del).DdeⅠ酶切后,凝胶电泳可得到部分酶切(CYP2A6wt/CYP2A6v2基因型),未被酶切(CYP2A6wt/CYP2A6wt基因型)两种类型DNA片段;XcmⅠ酶切后,凝胶电泳可得到部分酶切(CYP2A6wt/CYP2A6v1基因型),未被酶切(CYP2A6wt/CYP2A6wt基因型)两种类型DNA片段.其中,部分血样标本同时被DdeⅠ和XcmⅠ部分酶切(CYP2A6v2/CYP2A6v1基因型).应用此方法检测,发现中国人群胃癌患者存在CYP2A6等位基因多态性.经双盲重复检测,上述结果一致.结论:采用一步PCR-RFLP技术可以建立简单、稳定、特异的CYP2A6基因多态性分析法.
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