【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA linc00662（LncRNA linc00662）通过微小RNA-16-5p（miR-16-5p）/[丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（wee1）]信号轴在肝细胞癌（HCC）细胞增殖及凋亡中的作用。方法 该研究时间为2019年8月至2020年10月，体外培养正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-
【基金项目】
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昆明市科技计划（2017-1-S-15304）；
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目的 探讨长链非编码RNA linc00662（LncRNA linc00662）通过微小RNA-16-5p（miR-16-5p）/[丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（wee1）]信号轴在肝细胞癌（HCC）细胞增殖及凋亡中的作用。方法 该研究时间为2019年8月至2020年10月，体外培养正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中linc00662、miR-16-5p和wee1的表达。以HepG2细胞作为研究对象，设置shRNA阴性对照（sh-NC）组、linc00662-shRNA干扰（sh-linc00662）组、抑制剂阴性对照（inhibitor-NC）组、miR-16-5p抑制剂（miR-16-5p inhibitor）组、siRNA阴性对照（si-NC）组、wee1-siRNA干扰（siwee1）组、linc00662-shRNA干扰联合miR-16-5p抑制剂（sh-linc00662+miR-16-5p inhibitor）组和miR-16-5p抑制剂联合wee1-siR-NA干扰（miR-16-5p inhibitor+si-wee1）组。CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖活性；流式细胞仪检测细胞凋亡水平；蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）]表达。双萤光素酶报告基因实验检测linc00662、miR-16-5p和wee1之间的相关性。结果 PCR结果显示相比较LO2细胞，linc00662在SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7细胞中普遍高表达[0.95±0.14比2.12±0.17、3.86±0.15、2.31±0.14、1.82±0.18,P＜0.001]。与sh-NC组相比，敲低linc00662能抑制肝癌细胞增殖（P＜0.001）并诱导细胞凋亡（P＜0.001）。双萤光素酶报告结果显示linc00662直接靶向结合miR-16-5p并负调控miR-16-5p的表达。同时，miR-16-5p直接靶向结合wee1并负调控wee1的表达。下调miR-16-5p表达可以减轻敲低linc00662对肝癌细胞生长的抑制作用。此外，linc00662可能通过miR-16-5p/wee1通路发挥促癌作用。结论 Linc00662是一种在肝癌细胞中上调的LncRNA，可以通过miR-16-5p/wee1轴促进肝癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。
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