【摘 要】
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目的探索从石蜡包埋乳腺癌样本中提取总RNA的质量和产量,并检测其基因的表达情况。方法收集保存时间1~17 a不等的人乳腺癌石蜡组织样本153例,取5μm厚切片1~15张,用Roche和Am
【机 构】
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军事医学科学院附属医院,汕头大学医学院,中国科学院,北京基因组研究所,
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目的探索从石蜡包埋乳腺癌样本中提取总RNA的质量和产量,并检测其基因的表达情况。方法收集保存时间1~17 a不等的人乳腺癌石蜡组织样本153例,取5μm厚切片1~15张,用Roche和Ambion两种试剂盒提取总RNA。采用随机引物将mRNA反转录为cDNA,SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量PCR分析ACTB、GAPDH、RPLPO和GUSB管家基因mRNA的表达情况。结果153例标本总RNA浓度在3~375 ng/μl范围,总产量0.18~18.5μg,A260/280值在1.32~2.07范围,RNA琼脂糖凝胶电泳片段弥散在100~1000 bp之间。81例样本的4个管家基因的平均Ct值在24~30范围,随着样本保存时间的延长,Ct值也逐渐增加。结论从石蜡包埋样品标本中提取的RNA产量及质量可满足实验的要求,总RNA有所降解,但可以进行目的基因mRNA的检测,保存10 a以上的样本也能够进行基因表达研究,在基础研究和临床实践方面具有广阔的应用价值。
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