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目的
建立一种简单、快速、准确地检测人群外周血白细胞中泛素化组蛋白H2B (ubiquityl-histone H2B, ubH2B)修饰水平的方法。
方法利用ubH2B标准样品建立检测人群外周血白细胞中ubH2B的斑点杂交方法,确定最佳的封闭液及一抗、二抗稀释度,并确定斑点杂交方法的灵敏度、检测范围及重复性。采用建立的斑点杂交方法检测45份人外周血白细胞中ubH2B的水平。
结果斑点杂交方法检测ubH2B的最佳封闭液为5%牛血清白蛋白(albumin from bovine serum, BSA),一抗稀释度为1∶500、二抗稀释度为1∶10 000。斑点杂交方法检测ubH2B的灵敏度为150 ng。ubH2B浓度在3.000~ 48.000 ng/μl有良好线性关系,决定系数(R2)= 0.998。批内和批间的变异系数分别为7.00%和6.08%。45份人群组蛋白样品中ubH2B为0~ 4.090 ng/μl, ubH2B在总组蛋白中的含量范围为0~ 255.625 ng/mg。
结论斑点杂交方法灵敏度高、重复性好,可应用于人群外周血白细胞中ubH2B的检测。