【摘 要】
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本实验应用改良的异硫氰酸胍法从睾丸中提取总RNA。经紫外分光光度计检测,OD260nm/OD280nm≥1.8,表明蛋白质污染少,RNA纯度较高。经变性琼脂糖凝胶电泳可见清晰的18s和28s两条带,经RNaseA消化的样品中条带消失,表明所提
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本实验应用改良的异硫氰酸胍法从睾丸中提取总RNA。经紫外分光光度计检测,OD260nm/OD280nm≥1.8,表明蛋白质污染少,RNA纯度较高。经变性琼脂糖凝胶电泳可见清晰的18s和28s两条带,经RNaseA消化的样品中条带消失,表明所提取物质确为RNA,并无降解。以雄激素受体cDNA为探针,应用分子杂交法检定杂交信号居18s稍后,表明总RNA中这种特定的mRNA未发生降解。同时证明RNA提取过程中,如第一步-20℃沉淀时间过长,可引起RNA降解。
In this experiment, the modified guanidinium isothiocyanate method was used to extract total RNA from testis. The UV spectrophotometer detection, OD260nm / OD280nm ≥ 1.8, indicating less protein contamination, RNA purity higher. The denatured agarose gel electrophoresis showed clearly two bands of 18s and 28s. The disappearance of bands in the sample digested with RNaseA indicated that the extracted material was indeed RNA and had no degradation. Using androgen receptor cDNA as a probe, the hybridization signal was detected by molecular hybridization for 18 s, indicating that this specific mRNA did not degrade in total RNA. At the same time, it was proved that RNA extraction process, such as the first step of -20 ℃ precipitation time is too long, can cause RNA degradation.
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