双色荧光示踪胶质瘤细胞定植脉络膜丛的生长特征

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我们曾在双色荧光示踪胶质瘤脑尾状核移植的裸小鼠模型中偶尔见到为数极少的脉络膜丛上有胶质瘤细胞定植[1],但难于分析脉络膜丛对胶质瘤细胞生长所起的作用.我们将胶质瘤细胞经脑室注入直接定植于脉络膜丛,制备类似脉络膜乳头状癌的模型,并分析其生长特征.rn一、材料与方法rn参照文献[2]方法将红色荧光蛋白(RFP)转染GL261胶质瘤细胞(中国科学院细胞所),借助立体定向仪(淮北正华公司)经位于前囟前0.22 mm、中线左侧旁开1 mm的事先钻孔处,将1 ×105个(10ul)GL261-RFP细胞在微量注射泵控制下,垂直、缓慢注入自家培育的荧光裸小鼠脑室内,共接种10只鼠,约4周,小鼠出现恶病质时经10%水合氯醛麻醉后用4%多聚甲醛进行心脏灌注,然后解剖取出全脑,置于4%多聚甲醛中7~8h后转入20%蔗糖溶液脱水,待沉底后转入30%蔗糖溶液再次脱水,再次沉底后置于SLY冠状位脑切片模具内(北京硕林苑科技有限公司),制作厚1mm连续切片,收集见到肿瘤组织的第1张和最后1张片,再进行厚5 μm连续切片,即可在荧光显微镜下观察双色荧光照片.
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