氧化应激介导STAT3/p53通路调控邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导的小鼠初级精母细胞凋亡

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目的 研究氧化应激在邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl-phthalate, MEHP)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2spd)毒性中的作用及机制。方法 将培养的GC-2spd细胞分为对照组(含0.1%二甲基亚砜的无血清培养基)、MEHP染毒组(1、10、100μmol/L MEHP 3个不同剂量组)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理组(100μmol/L NAC+100μmol/L MEHP),MEHP染毒24 h, NAC预处理2 h, NAC的预处理浓度(100μmol/L)通过CCK-8实验确定。采用DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(reactive oxide species, ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot法检测细胞内线粒体凋亡通路相关蛋白和p-STAT3Tyr705、P53蛋白表达水平。结果 随着MEHP染毒剂量升高,细胞内代表活性氧水平的绿色荧光信号增多;不同剂量MEHP染毒组的线粒体膜电位均下降,表现为红绿荧光细胞比例比值减小,10和100μmol/L MEHP染毒组的红绿荧光细胞比例比值分别为5.15±1.68和4.09±1.72,明显低于对照组(7.91±1.24)(P<0.05);促凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平比值(Bax/Bcl-2)在1、10、100μmol/L MEHP染毒组分别为1.23±0.17、2.64±0.43和4.75±0.73,与对照组(0.52±0.11)相比明显增加(P<0.05);cytochrome C蛋白表达水平在100μmol/L MEHP染毒组升高为0.83±0.09,cleaved caspase-9蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组升高为0.41±0.03和0.52±0.09,cleaved caspase-3蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组升高为0.60±0.12和0.84±0.17,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);STAT3/p53通路中,p-STAT3Tyr705蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组分别下降为0.70±0.14和0.41±0.04,P53蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组分别升高为1.32±0.05和1.66±0.22,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);NAC预处理后,与100μmol/L MEHP组相比,NAC预处理组ROS生成减少,线粒体膜电位升高为5.92±1.64,Bax/Bcl-2下降为1.92±0.06, cytochrome C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白表达水平分别下降为0.57±0.07、0.35±0.04和0.53±0.06,p-STAT3Tyr705蛋白表达水平升高为0.86±0.07,P53蛋白表达水平下降为1.01±0.06,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MEHP诱导GC-2spd细胞凋亡可能与ROS介导的STAT3/p53通路调控线粒体凋亡通路有关。
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