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目的选择最优的细胞因子组合方案体外制备CIK细胞,为基于CIK细胞的肿瘤免疫治疗提供有价值的数据。方法采用Ficoll分离法获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),PBMC加入激发型鼠抗人抗-CD3单抗(1μg/m L)包被的96孔板(2×106孔),各孔中分别按浓度梯度加入激发型抗-CD28单抗0.25μg/m L、0.5μg/m L、1μg/m L,IL-2 0.02万U/m L,0.1万U/m L,0.5万U/m L,IFN-γ50 ng/m L、100 ng/m L、200 ng/m L,于1、2、3、4、5、6、7 d通过细胞计数计算各孔细胞数量,以确定能获得最佳增殖效果的最低浓度,该浓度即为CIK诱导的合适浓度。获得最适浓度后,采用CCK-8掺入法检测不同诱导方案下CIK细胞体外增殖能力,采用流式细胞术观察在活化的于1、3、5、7 d不同诱导方案下CIK上CD4+、CD8+、CD56+的表达。结果 PBMC在细胞因子作用下均能增殖,加入细胞因子后培养至4-5 d时,可见细胞体积逐渐增大,培养至7 d细胞的胞体和胞核均增大,胞浆增多,胞核密度加强。细胞增殖曲线提示,在抗-CD3单抗浓度为1μg/m L下抗-CD28单抗、IL-2、IFN-γ的最适浓度分别为0.5μg/m L,、0.1万U/m L、100ng/m L。CCK法和流式细胞术分析显示,各组CIK细胞随着培养时间的延长增殖愈显著,且组间呈现统计学差异,各组中以抗-CD3+抗-CD28+IL-2+IFN-γ联合培养组CIK细胞体外增殖能力最强(P<0.05),CD4+、CD8+和CD56+细胞比例培养前分别为(44.8±11.3)%、(21.1±8.5)%、(3.4±0.7)%,培养后分别为(72.1±13.8)%、(51.1±17.9)%、(10.7±4.4)%,比较均有差异性(P<0.05)。结论采用激发型抗-CD3+抗-CD28+IL-2+IFN-γ联合培养方案获得的CIK细胞体外增殖能力最强,表型最为成熟。