探讨慢病毒介导血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)/骨形态发生蛋白2(BMP－2)双基因对犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)的转染及其表达情况。
方法分离培养犬BMSCs，构建携带VEGF165和BMP－2基因的重组慢病毒表达载体，利用293T细胞包装、生产携带VEGF165和BMP－2基因的重组慢病毒(Lv－BMP、Lv－VEGF)，分为未转染组、VEGF165组、BMP－2组及VEGF165＋BMP－2组(联合转染组)，后三组分别转染第三代犬BMSCs。于转染后7 d运用实时荧光定量RT－PCR检测各组BMSCs中VEGF165、BMP－2 mRNA表达；于转染后5，28 d运用Western blotting检测BMSCs中VEGF165、BMP－2蛋白表达情况；运用细胞四唑盐比色法(MTT)测定转染后各组BMSCs生长情况并绘制生长曲线。
结果RT－PCR检测结果显示，VEGF165 mRNA仅在VEGF165组与双基因联合转染组中存在高表达，BMP－2 mRNA仅在BMP－2组与双基因联合转染组中存在高表达，且各两组间mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)；Western blotting法结果均显示，VEGF165蛋白仅在VEGF165组与双基因联合转染组中有特异性表现，BMP－2蛋白仅在BMP－2组与双基因联合转染组中有特异性表现；MTT测定显示各组细胞在培养初期有2～3 d左右的相对静止期，从第3天起各组细胞均增殖迅速，呈现对数生长，7 d后进入平台期，细胞增殖减缓，吸光度(A)值比较发现转染与未转染细胞间生长情况差异无统计学意义(P>0.05)。
结论慢病毒介导的VEGF165/BMP－2双基因修饰方法可成功转染BMSCs，并得到持续高表达VEGF165/BMP－2的BMSCs。